ਪੀਸੀਆਰ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਢੁਕਵੀਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ ਰਸਮੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਸ਼ਰਤਾਂ ਹਨ।
ਤਾਂ ਸਾਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜਾਂਚ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਦੀ ਕਿਵੇਂ ਲੋੜ ਹੈ?
ਮੁੱਖ ਸੂਚਕ ਹਨ ਬੇਸਲਾਈਨ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ, ਸੀਟੀ ਵੈਲਯੂ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ, ਘੱਟ-ਇਕਾਗਰਤਾ ਨਮੂਨਾ ਖੋਜ, ਸੀਵੀ, ਆਦਿ।
ਬੇਸਲਾਈਨ
ਬੇਸਲਾਈਨ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਵਿੱਚ ਹਰੀਜੱਟਲ ਲਾਈਨ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪਹਿਲੇ ਕੁਝ ਚੱਕਰਾਂ ਵਿੱਚ, ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਹੀਂ ਬਦਲਦਾ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸਿੱਧੀ ਲਾਈਨ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਸਿੱਧੀ ਰੇਖਾ ਬੇਸਲਾਈਨ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਧਿਆਨ ਦਿਓ ਕਿ ਕੀ ਬੇਸਲਾਈਨ ਪੱਧਰ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰੋਬ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਬੇਸਲਾਈਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗੀ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬੇਸਲਾਈਨ ਦਾ ਵਧਣਾ ਜਾਂ ਡਿੱਗਣਾ।ਬੇਸਲਾਈਨ ਵੀ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਅਨੁਭਵੀ ਸੂਚਕ ਹੈ।
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ
ਇੱਕ ਹੋਰ ਅਨੁਭਵੀ ਸੂਚਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਦੀ ਸ਼ਕਲ ਹੈ।ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਹੋਰ ਅਸਧਾਰਨ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਐਸ-ਆਕਾਰ ਵਾਲਾ ਕਰਵ ਹੋਣਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।
Ct ਮੁੱਲ
ਬੇਸਲਾਈਨ ਤੋਂ ਘਾਤਕ ਵਾਧੇ ਤੱਕ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਬਿੰਦੂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ Ct ਮੁੱਲ ਹੈ।
ਇੱਕੋ ਨਮੂਨੇ ਲਈ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਂਪਲੀਫ਼ਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਨਿਕਲਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਅਨੁਸਾਰੀ Ct ਮੁੱਲ ਐਂਪਲੀਫ਼ਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਡਿਗਰੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋਵੇਗਾ।ਸਿਧਾਂਤ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੜਤਾਲ ਦਾ Ct ਮੁੱਲ ਜਿੰਨਾ ਛੋਟਾ ਅਸੀਂ ਚੁਣਦੇ ਹਾਂ, ਉੱਨਾ ਹੀ ਵਧੀਆ।
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ
ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਅਤੇ ਸਥਿਰ ਤਰੀਕਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਹੈ, ਜੋ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਦੁਆਰਾ ਵੀ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੈ।ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਸੰਖਿਆ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਬਣਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਇਹ ਨਮੂਨੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੇਂਦਰਿਤ ਸਟਾਕ ਹੱਲਾਂ ਦੇ ਸੀਰੀਅਲ ਡਿਲਿਊਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ 10-ਗੁਣਾ ਪਤਲਾ।ਪਤਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, Cq ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਿਆਰੀ qPCR ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਖਿੱਚੋ ਅਤੇ ਰੇਖਿਕ ਸਮੀਕਰਨ Cq= -klgX0+b, ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ E=10(-1 /k1)- ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਬੰਧਿਤ Cq ਮੁੱਲ।ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ qPCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦਾ 90%-110% (3.6>k>3.1) ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਹੋਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।
ਘੱਟ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਖੋਜ
ਜਦੋਂ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀਆਂ ਖੋਜ ਦਰਾਂ ਵੱਖਰੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।ਅਸੀਂ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ 20 ਘੱਟ-ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨੇ ਚੁਣਦੇ ਹਾਂ, ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਉੱਚੀ ਖੋਜ ਦਰ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਪ੍ਰੋਬ ਸਿਸਟਮ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।
ਪਰਿਵਰਤਨ ਗੁਣਾਂਕ (CV)
10 ਡੁਪਲੀਕੇਟ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਖੋਜ ਲਈ ਰੀਏਜੈਂਟ ਦੇ ਲਾਈਨ ਸਟੈਂਡਰਡ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੜਤਾਲਾਂ ਨਾਲ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਰੀਐਜੈਂਟਸ:
ਸ਼ੁੱਧਤਾ
ਇੱਕ ਬੈਚ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ: ਪਰੀਖਿਆ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਲਘੂਗਣਕ ਮੁੱਲ ਦਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਗੁਣਾਂਕ (CV,%) ≤5% ਹੈ।ਜਦੋਂ ਨਮੂਨਾ ਇਕਾਗਰਤਾ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਖੋਜ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਲਘੂਗਣਕ ਦਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਗੁਣਾਂਕ (CV,%) ≤10% ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਗੁਣਾਤਮਕ ਰੀਐਜੈਂਟਸ:
ਸ਼ੁੱਧਤਾ
ਇੱਕ ਬੈਚ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ:
(1) Ct ਮੁੱਲ (CV,%) ≤5% ਦੀ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਗੁਣਾਂਕ
ਇੱਕੋ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ 10 ਵਾਰ ਸਮਾਨਾਂਤਰ ਵਿੱਚ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਇਕਸਾਰ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਸਤੰਬਰ-18-2021
