ਮੇਰਾ ਮੰਨਣਾ ਹੈ ਕਿ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਹਰ ਕੋਈ ਹਮੇਸ਼ਾ ਅਜਿਹੀਆਂ ਜਾਂ ਅਜਿਹੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਦਾ ਸਾਹਮਣਾ ਕਰੇਗਾ, ਪਰ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਨੂੰ ਦੋ ਮੁੱਖ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ:

ਜੀਨ ਟੈਂਪਲੇਟ (ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ) ਦਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਪ੍ਰਸਾਰਨ;
ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਨ ਪ੍ਰਸਾਰਣ.
ਇਹਨਾਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰਨ ਲਈ ਐਡਿਟਿਵਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਇੱਕ ਆਮ ਰਣਨੀਤੀ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ additives ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੇ ਦੋ ਪਹਿਲੂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ:
ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰਜੀਨਾਂ ਦੀ (ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ);
ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਿੰਗ ਨੂੰ ਘਟਾਓ।
ਅੱਜ, ਸੰਪਾਦਕ ਤੁਹਾਨੂੰ PCR ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕਾਰਜਾਂ ਵਿੱਚ ਆਮ ਜੋੜਾਂ ਬਾਰੇ ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ ਜਾਣੂ ਕਰਵਾਏਗਾ।
ਐਡੀਟਿਵ ਜੋ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ
sulfoxide(DMSO)
ਜੀਨ ਦੇ ਨਮੂਨੇਉੱਚ GC ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਨਾਲ।ਹਾਲਾਂਕਿ, DMSO ਟਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਵੀ ਬਹੁਤ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਪਹੁੰਚਯੋਗਤਾ ਅਤੇ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਸੰਤੁਲਨ ਬਣਾਉਣਾ ਹੋਵੇਗਾ।ਸੰਪਾਦਕ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਤੁਸੀਂ DSMO ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 2% ਤੋਂ 10% ਤੱਕ, ਤੁਹਾਡੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ।
ਗੈਰ-ionic ਡਿਟਰਜੈਂਟ
ਗੈਰ-ਆਈਓਨਿਕ ਡਿਟਰਜੈਂਟ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 0.1-1% ਟ੍ਰਾਈਟਨ ਐਕਸ-100, ਟਵੀਨ 20 ਜਾਂ ਐਨਪੀ-40, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਟੈਂਪਲੇਟ ਜੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਨ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਸਮੱਸਿਆ ਦਾ ਕਾਰਨ ਵੀ ਬਣੇਗਾ।ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਐਡਿਟਿਵ ਘੱਟ-ਉਪਜ ਵਾਲੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਲਈ ਬਿਨਾਂ ਮਲਬੇ ਦੇ ਵਧੀਆ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਅਸ਼ੁੱਧ ਪੀਆਰਸੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਇੰਨੇ ਵਧੀਆ ਨਹੀਂ ਹਨ।ਗੈਰ-ਆਯੋਨਿਕ ਡਿਟਰਜੈਂਟ ਦਾ ਇੱਕ ਹੋਰ ਫਾਇਦਾ SDS ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਐਸਡੀਐਸ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਲਿਆਂਦਾ ਜਾਵੇਗਾ, ਜੋ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।ਇਸਲਈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ 0.5% Tween-20 ਜਾਂ Tween-40 ਜੋੜਨਾ SDS ਦੇ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬੇਅਸਰ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਬੇਟੇਨੇ_
ਬੀਟੇਨ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਪਾਰਕ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟਾਂ ਲਈ ਇੱਕ "ਰਹੱਸ" ਜੋੜ ਹੈ।ਜੇ ਤੁਸੀਂ ਬੇਟੇਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਤੁਹਾਨੂੰ ਬੇਟੇਨ ਜਾਂ ਬੇਟੇਨ ਮੋਨੋ-ਹਾਈਡ੍ਰੇਟ (ਬੇਟੇਨ ਜਾਂ ਬੇਟੇਨ ਮੋਨੋ-ਹਾਈਡ੍ਰੇਟ) ਪਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਬੇਟੇਨ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਾਈਡ (ਬੇਟੇਨ ਐਚਸੀਐਲ) ਨਹੀਂ, 1-1.7M ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਬੇਟੇਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਵਿੱਚ ਵੀ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਪਿਘਲਣ/ਡੀਐਨਏ ਵਿਕਾਰ ਦੀ ਬੇਸ ਪੇਅਰ ਕੰਪੋਜੀਸ਼ਨ ਨਿਰਭਰਤਾ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਿੰਗ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਐਡਿਟਿਵ
ਫਾਰਮਾਮਾਈਡ
ਫਾਰਮਾਮਾਈਡ ਇੱਕ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਜੈਵਿਕ ਪੀਸੀਆਰ ਐਡਿਟਿਵ ਹੈ।ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਗਰੂਵ ਅਤੇ ਮਾਮੂਲੀ ਗਰੂਵ ਦੇ ਨਾਲ ਜੋੜ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਾਸਟਰ ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ ਹੈਲਿਕਸ ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪਿਘਲਣ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਫਾਰਮਾਮਾਈਡ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 1%-5% ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਟੈਟਰਾਮੇਥਾਈਲਅਮੋਨੀਅਮ ਕਲੋਰਾਈਡ( TMAC)
ਟੈਟਰਾਮੇਥਾਈਲਾਮੋਨੀਅਮ ਕਲੋਰਾਈਡ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ (ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ) ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪਿਘਲਣ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, TMAC ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਿੰਗ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ DNA ਅਤੇ RNA ਦੀ ਮਿਸਬਾਈਡਿੰਗ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ ਵਰਤਦੇ ਹੋਡੀਜਨਰੇਟ ਪ੍ਰਾਈਮਰਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ, TMAC ਨੂੰ ਜੋੜਨਾ ਯਾਦ ਰੱਖੋ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 15-100mM ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਹੋਰ ਆਮ additives
ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਗਏ ਐਡਿਟਿਵ ਦੀਆਂ ਦੋ ਸ਼੍ਰੇਣੀਆਂ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਆਮ ਐਡਿਟਿਵ ਹਨ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਕਾਰਜ ਹਨ, ਉਹ ਵੀ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ.
ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ
ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਲਾਜ਼ਮੀ ਕੋਫੈਕਟਰ (ਕੋਫੈਕਟਰ) ਹੈ, ਭਾਵ, ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ, ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਹਰੇਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਵੱਖਰੀ ਹੋਵੇਗੀ।ਚੇਲੇਟਿੰਗ ਏਜੰਟ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ EDTA ਜਾਂ citrate), dNTPs ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਸਾਰੇ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਜੇਕਰ ਤੁਹਾਨੂੰ ਆਪਣੇ PCR ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, 1.0 ਤੋਂ 4.0mM ਤੱਕ, ਵਿਚਕਾਰ 0.5–1mm ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਨਾਲ।
ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਮਲਟੀਪਲ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਚੱਕਰ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਕਲੋਰਾਈਡ ਘੋਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਤੁਹਾਨੂੰ ਹਰ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੁਲਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ ਐਲਬਿਊਮਿਨ(ਬੋਵਾਈਨ ਐਲਬਿਊਮਿਨ, BSA)
ਅਣੂ ਰਸਾਇਣ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ ਐਲਬਿਊਮਿਨ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਆਮ ਜੋੜ ਹੈ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਪਾਚਨ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ।ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ, BSA ਫੀਨੋਲਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਰਗੇ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦਗਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਅਤੇ ਇਹ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਟੈਸਟ ਟਿਊਬ ਦੀ ਕੰਧ 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਚਿਪਕਣ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੀ ਗਈ ਬੀਐਸਏ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.8 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਮਿ.ਲੀ. ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਸਕਦੀ ਹੈ।
 
ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦ:
ਪੀਸੀਆਰ ਹੀਰੋ(ਰੰਗ ਨਾਲ)
ਪੀਸੀਆਰ ਹੀਰੋ