ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੈ ਜੋ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਜਾਨਵਰਾਂ ਜਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਕਈ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ, ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਰੈਗੂਲਰ ਪੀਸੀਆਰ ਵਾਂਗ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ

ਮੁੱਖ ਅੰਤਰ ਸਿੱਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਕਸਟਮ ਬਫਰ ਹੈ, ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਬਫਰ ਦੀ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਲਈ ਅਨੁਸਾਰੀ ਲੋੜਾਂ ਹਨ।

ਹਾਲਾਂਕਿ ਆਮ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਜਾਂ ਘੱਟ ਪੀਸੀਆਰ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਸਿੱਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਅਜੇ ਵੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਅਤੇ ਬਫਰਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਵਾਧਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਰਵਾਇਤੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੇਕਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਦੇ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਪ੍ਰਸਿੱਧ ਤਕਨੀਕਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ।

01 ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਜਾਨਵਰਾਂ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ

ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਪਹਿਲੀ ਵਰਤੋਂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚੂਹੇ ਦੇ ਖੂਨ, ਟਿਸ਼ੂ ਅਤੇ ਵਾਲ, ਬਿੱਲੀ, ਮੁਰਗੀ, ਖਰਗੋਸ਼, ਭੇਡ, ਪਸ਼ੂ, ਆਦਿ, ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਪੱਤੇ ਅਤੇ ਬੀਜ ਆਦਿ, ਜੀਨੋਟਾਈਪਿੰਗ, ਟ੍ਰਾਂਸਜੇਨਿਕ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਖੋਜ, ਜੀਨ ਨਾਕਆਉਟ ਖੋਜ, ਜੀਨ ਨਾਕਆਉਟ ਫੀਲਡ, ਐਸਐਨਏਆਈਡੈਂਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਐੱਸ.ਐੱਨ.ਏ. ਐੱਸ.

ਇਹਨਾਂ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਆਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ, ਯਾਨੀ, ਟੀਚਾ ਜੀਨ ਦੀ ਸਮਗਰੀ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਵੱਧ ਹੈ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਸਿੱਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਨਾ ਸਿਰਫ ਸਮਾਂ ਬਚਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਥੋੜਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਲਾਗਤ ਵੀ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਜਰਾਸੀਮ ਖੋਜਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸਿੱਧੀ ਪੀਸੀਆਰ ਹਾਲ ਹੀ ਦੇ ਸਾਲਾਂ ਦੀ ਗੱਲ ਹੈ, ਕੁਝ ਪੀਸੀਆਰ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨਿਰਮਾਤਾਵਾਂ ਨੇ ਨਵੀਨਤਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਇਸ ਦਿਸ਼ਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਯਤਨ ਕੀਤੇ ਹਨ।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਸ ਕੋਵਿਡ-19 ਮਹਾਮਾਰੀ ਵਿੱਚ, ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਅਜਿਹੇ ਖੋਜ ਉਤਪਾਦ ਬਜ਼ਾਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਹੋਏ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ SARS-CoV-2 ਨਿਊਕਲੀਇਕ ਐਸਿਡ ਡਿਟੈਕਸ਼ਨ ਕਿੱਟ (ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਪੀਸੀਆਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪ੍ਰੋਬ ਮੈਥਡ) ਫੋਰਜੀਨ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜ ਅਤੇ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਐਸਿਡ-ਕੋਵ-2 ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਖੋਜਾਂ ਵਿੱਚ ਗੁਣਾਤਮਕ ਐਸਿਡ-ਕੋਵ-2 ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਖੋਜ ਲਈ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT PCR ਤਕਨਾਲੋਜੀ (rRT-PCR) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ। oropharyngeal swab ਨਮੂਨੇ.

ਫੋਰਜੀਨ ਉਹਨਾਂ ਕੰਪਨੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ ਜੋ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਰਹੀ ਹੈ, ਆਮ ORF1ab, N, E, ਅਤੇਰੂਪ ਮਨੁੱਖੀ ਨੈਸੋਫੈਰਨਜੀਅਲ ਜਾਂ ਓਰੋਫੈਰਨਜੀਅਲ ਸਵੈਬ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਜਿਵੇਂ ਕਿ SARS-CoV-2 B.1.1.7 ਵੰਸ਼ (UK), B.1.351 ਵੰਸ਼ (ZA), B.1.617 ਵੰਸ਼ (IND) ਅਤੇ P.1 ਵੰਸ਼ (BR) ਵਿੱਚ ਵੰਸ਼ ਨਿਉਕਲੀਕ ਐਸਿਡ।

02  ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ

ਨਮੂਨਾ Lysate

ਨਮੂਨਾ lysate ਆਪਣੇ ਆਪ ਦੁਆਰਾ ਸੰਰਚਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਖਰੀਦਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.ਲਾਈਸੇਟ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬ੍ਰਾਂਡਾਂ ਦੀ ਰਚਨਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਲਾਈਸਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਵੱਖਰਾ ਬਣਾ ਦੇਵੇਗਾ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਲਾਈਸਿੰਗ ਦਾ ਸਮਾਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਵੱਖਰਾ ਹੋਵੇਗਾ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਜਾਂ ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਲਿਸਿਸ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਾਇਰਸਾਂ ਲਈ ਲਿਸਿਸ ਦਾ ਹੱਲ 3-10 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਪੀਸੀਆਰ ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ

ਖਾਸ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਦਾ ਕੋਰ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਹੈ।

ਨਮੂਨੇ ਵਿਚਲੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਜਾਂ ਰੋਕੋ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੇ ਹਨ

ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਲਾਈਸੇਟ ਨਾਲ ਸੰਸਾਧਿਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਲਿਪਿਡ ਅਤੇ ਹੋਰ ਸੈੱਲ ਮਲਬੇ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ ਜਾਵੇਗਾ, ਇਹ ਪਦਾਰਥ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕ ਦੇਣਗੇ।ਇਸ ਲਈ, ਸਿੱਧੇ ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਇਹਨਾਂ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਅਨੁਸਾਰੀ ਹਟਾਉਣ ਜਾਂ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

03  ਸਿੱਧੇ PCR ਦੇ ਪੰਜ ਗਿਆਨ ਬਿੰਦੂਆਂ ਦਾ ਸੰਗ੍ਰਹਿ

ਪਹਿਲਾਂ, ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੈਵਿਕ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਸਿੱਧੀ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਹੈ।ਇਸ ਤਕਨੀਕੀ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਅਤੇ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਵਸਤੂ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਣਾ, ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਨ ਲਈ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨਾ ਹੈ।

ਦੂਜਾ, ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਰਵਾਇਤੀ ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਇਸ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪੀਸੀਆਰ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।

ਤੀਜਾ, ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਟਿਸ਼ੂ ਨਮੂਨਿਆਂ 'ਤੇ ਰੁਟੀਨ ਗੁਣਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਇਸ ਵਿੱਚ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​​​ਬੈਕਗ੍ਰਾਉਂਡ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਸਮਰੱਥਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਵਿਰੋਧੀ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਬੁਝਾਉਂਦੀ ਹੈ।

ਚੌਥਾ, ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੁਆਰਾ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਏ ਗਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿਰਫ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ, ਨਮਕ ਆਇਨਾਂ, ਆਦਿ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਹਟਾਉਂਦੇ ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਹੋਵੇ।

ਪੰਜਵਾਂ, ਟਿਸ਼ੂ ਦਾ ਨਮੂਨਾ ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਇਲਾਜ ਦੇ ਡਾਇਰੈਕਟ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੁਆਰਾ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।