qPCR ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਵੀ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਲਿੰਕ ਹੈ।ਕੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਢੁਕਵੇਂ ਹਨ ਜਾਂ ਨਹੀਂ, ਇਸ ਗੱਲ ਨਾਲ ਨੇੜਿਓਂ ਸਬੰਧਤ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਮਿਆਰ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦੀ ਹੈ, ਕੀ ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਖਾਸ ਹਨ, ਅਤੇ ਕੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜੇ ਉਪਲਬਧ ਹਨ।
ਤਾਂ qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਕਿਵੇਂ ਬਣਾਇਆ ਜਾਵੇ?ਉੱਚ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ?
ਅੱਜ, ਅਸੀਂ ਤੁਹਾਨੂੰ qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਲਈ ਲੈ ਕੇ ਜਾਵਾਂਗੇ, ਅਤੇ qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਕੁਸ਼ਲ ਗਿਆਨ ਹੁਨਰ ਬਣਨ ਦਿਓ।
qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਨੁਕਤਿਆਂ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਦਿਓ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 100-300 bp ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ, Tm ਮੁੱਲ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ 60 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅੱਪਸਟ੍ਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਅੰਤ ਨੂੰ G ਜਾਂ C, ਆਦਿ ਦੀ ਉਡੀਕ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
1. ਅੰਦਰ ਫੈਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ
qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਡਿਜ਼ਾਇਨ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਅੰਦਰਲੇ ਹਿੱਸੇ ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨਾ gDNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾਣ ਤੋਂ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਤਪਾਦ ਸਾਰੇ cDNA ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਣ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਹਨ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ gDNA ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।
2. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 18-30 nt ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ 100-300 bp ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਕੰਟਰੋਲ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰੇਗਾ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਇਹ ਬਹੁਤ ਲੰਬਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ) ਬਣਾ ਦੇਵੇਗਾ।ਜੇਕਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਬਹੁਤ ਲੰਮਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ।
3. GC ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ Tm ਮੁੱਲ
ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ GC ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ 40% ਅਤੇ 60% ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਜੇ ਇਹ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਨਹੀਂ ਹੈ.ਸਮਾਨ Tm ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਫਾਰਵਰਡ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ GC ਸਮੱਗਰੀ ਸਮਾਨ ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
Tm ਦਾ ਮੁੱਲ ਜਿੱਥੋਂ ਤੱਕ ਸੰਭਵ ਹੋਵੇ 55-65°C ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 60°C, ਅਤੇ ਅੱਪਸਟ੍ਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਦਾ Tm ਮੁੱਲ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ 4°C ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ।
4. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ A ਨੂੰ ਚੁਣਨ ਤੋਂ ਬਚੋ
ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦਾ 3′ ਸਿਰਾ ਮੇਲ ਨਹੀਂ ਖਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅਧਾਰਾਂ ਦੀ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਅੰਤਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਜਦੋਂ ਆਖਰੀ ਅਧਾਰ A ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਬੇਮੇਲ ਹੋਣ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ ਵੀ ਚੇਨ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਜਦੋਂ ਆਖਰੀ ਅਧਾਰ T ​​When ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਬੇਮੇਲ ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ 'ਤੇ A ਨੂੰ ਚੁਣਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ, ਅਤੇ T ਨੂੰ ਚੁਣਨਾ ਬਿਹਤਰ ਹੈ।
ਜੇਕਰ ਇਹ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਬ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਹੈ, ਤਾਂ ਪੜਤਾਲ ਦਾ 5′ ਸਿਰਾ G ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ, ਕਿਉਂਕਿ ਜਦੋਂ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ G ਅਧਾਰ FAM ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਰਿਪੋਰਟਰ ਸਮੂਹ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ G FAM ਸਮੂਹ ਦੁਆਰਾ ਨਿਕਲੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਵੀ ਬੁਝਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਗਲਤ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜੇ ਨਿਕਲਦੇ ਹਨ।ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।
5. ਅਧਾਰ ਵੰਡ
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਬੇਸਾਂ ਦੀ ਵੰਡ ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬੇਤਰਤੀਬ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, 3′ ਦੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ 3 ਤੋਂ ਵੱਧ ਲਗਾਤਾਰ G ਜਾਂ C ਤੋਂ ਪਰਹੇਜ਼ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਤੇ 3 ਤੋਂ ਵੱਧ ਲਗਾਤਾਰG ਜਾਂ C GC-ਅਮੀਰ ਕ੍ਰਮ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਜੋੜਾ ਬਣਾਉਣਾ ਆਸਾਨ ਹੈ।
6. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਈ ਗਈ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਨਿਰਵਿਘਨ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗੀ।ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾ ਕੇ ਕਿ ਕੀ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਹੈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਵਿੱਚ ਇਸ ਖੇਤਰ ਤੋਂ ਬਚਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ।
7. ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਖੁਦ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਲਗਾਤਾਰ ਪੂਰਕ ਅਧਾਰਾਂ ਤੋਂ ਬਚਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਚਕਾਰ ਕੋਈ ਲਗਾਤਾਰ 4 ਅਧਾਰ ਪੂਰਕ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇਹ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ ਜੋੜ ਦੇਵੇਗਾ, ਜੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ।
ਅੱਪਸਟਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਪੂਰਕਤਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਈਮਰ ਪੈਦਾ ਕਰੇਗੀ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਏਗੀ ਅਤੇ ਗਿਣਾਤਮਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰੇਗੀ।ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਡਾਇਮਰ ਅਤੇ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਅਟੱਲ ਹਨ, ਤਾਂ △G ਮੁੱਲ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ (4.5 kcal/mol ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ)।
8. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਖਾਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ।
qPCR ਖੋਜ ਦਾ ਅੰਤਮ ਟੀਚਾ ਟੀਚਾ ਜੀਨ ਦੀ ਭਰਪੂਰਤਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਮਾਤਰਾ ਗਲਤ ਹੋਵੇਗੀ।ਇਸ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ BLAST ਦੁਆਰਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮ ਡੇਟਾਬੇਸ ਵਿੱਚ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਅੱਗੇ, ਅਸੀਂ qPCR ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਲਈ ਮਨੁੱਖੀ GAS6 (ਗ੍ਰੋਥ ਅਰੇਸਟ ਸਪੈਸ਼ਲ 6) ਜੀਨ ਨੂੰ ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ ਲੈਂਦੇ ਹਾਂ।
01 ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਜੀਨ
ਹੋਮੋ GAS6NCBI ਦੁਆਰਾਇੱਥੇ, ਸਾਨੂੰ ਜੀਨ ਦੇ ਨਾਮ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਉਹ ਇਕਸਾਰ ਹਨ।
02 ਜੀਨ ਕ੍ਰਮ ਲੱਭੋ
(1) ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਹੈ, ਤਾਂ ਪਹਿਲਾ ਇੱਕ ਚੁਣੋ, ਜੋ ਕਿ ਜੀਨ ਦਾ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਹੈ।
(2) ਜੇਕਰ ਟੀਚਾ ਕ੍ਰਮ mRNA ਹੈ, ਤਾਂ ਦੂਜਾ ਚੁਣੋ।ਦਾਖਲ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ ਵਿੱਚ "CDS" 'ਤੇ ਕਲਿੱਕ ਕਰੋ।ਭੂਰਾ ਪਿਛੋਕੜ ਕ੍ਰਮ ਜੀਨ ਦਾ ਕੋਡਿੰਗ ਕ੍ਰਮ ਹੈ।
03 ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ
ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਬਲਾਸਟ ਇੰਟਰਫੇਸ ਦਾਖਲ ਕਰੋ
ਉੱਪਰ ਖੱਬੇ ਪਾਸੇ ਫਾਸਟ ਫਾਰਮੈਟ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਕ੍ਰਮ ਨੰਬਰ ਜਾਂ ਕ੍ਰਮ ਦਰਜ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਨੂੰ ਭਰੋ।

"ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ" 'ਤੇ ਕਲਿੱਕ ਕਰੋ ਅਤੇ NCBI ਤੁਹਾਨੂੰ ਇਹ ਦੱਸਣ ਲਈ ਪੌਪ-ਅੱਪ ਕਰੇਗਾ ਕਿ ਅਜਿਹੇ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸਪਲੀਸਿੰਗ ਵੇਰੀਐਂਟਸ ਲਈ ਵਧਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ।ਅਸੀਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਪਲੀਸਿੰਗ ਵੇਰੀਐਂਟਸ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜੋੜਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਮ੍ਹਾਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੇਠਾਂ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ)।ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਚੱਲਣ ਵਿੱਚ ਕਈ ਸਕਿੰਟ ਲੱਗ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜੋੜਿਆਂ ਦਾ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਲਗਭਗ 60 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਮੱਧਮ ਲੰਬਾਈ, ਚੰਗੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਘੱਟ ਸਵੈ-ਪੂਰਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਚੁਣੋ, ਅਤੇ ਸਫਲਤਾ ਦਰ ਕਾਫ਼ੀ ਉੱਚੀ ਹੈ!
04ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਤਸਦੀਕ
ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਬਲਾਸਟ ਉਹਨਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਵੀ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਅਸੀਂ ਖੁਦ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਹਨ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪੰਨੇ 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਜਾਓ, ਸਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਅੱਪਸਟ੍ਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦਾਖਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਮਾਪਦੰਡ ਐਡਜਸਟ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਜਾਣਗੇ।ਸਬਮਿਟ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਤੁਸੀਂ ਦੇਖ ਸਕਦੇ ਹੋ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਜੋੜੀ ਹੋਰ ਜੀਨਾਂ 'ਤੇ ਵੀ ਮੌਜੂਦ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।ਜੇ ਉਹ ਸਾਰੇ ਜੀਨ 'ਤੇ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਸ ਨੂੰ ਅਸੀਂ ਵਧਾਉਣਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹਾਂ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਇਸ ਜੋੜੇ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਬਹੁਤ ਵਧੀਆ ਹੈ!(ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇਹ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਦਾ ਇੱਕੋ ਇੱਕ ਨਤੀਜਾ ਹੈ!)

05 ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਿਰਣਾ
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕਿਸ ਕਿਸਮ ਦਾ "ਸੰਪੂਰਨ" ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਹੈ ਜੋ "ਮਿਆਰੀ ਤੱਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ", "ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ", ਅਤੇ "ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ" ਨੂੰ ਜੋੜਦਾ ਹੈ?
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ

ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ
ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 90% -110% ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦੀ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਚੰਗੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਵਕਰ ਦੀ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਪੀਕ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ Tm>80°C ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਚੰਗੀ ਹੈ।
 
ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦ:
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਈਜ਼ੀ-ਸਾਈਬਰ ਗ੍ਰੀਨ ਆਈ
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਈਜ਼ੀ-ਟੈਕਮੈਨ