ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਮਨੁੱਖੀ ਸਰੀਰ ਦੀ ਜੈਨੇਟਿਕ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜਰਾਸੀਮਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ ਬਣਤਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੀ ਭਵਿੱਖਬਾਣੀ ਅਤੇ ਨਿਦਾਨ ਕਰਨ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।

ਹਾਲ ਹੀ ਦੇ ਸਾਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਅਣੂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੇ ਅਪਗ੍ਰੇਡ ਅਤੇ ਦੁਹਰਾਅ ਦੇ ਨਾਲ, ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਦੀ ਕਲੀਨਿਕਲ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਵਧੇਰੇ ਅਤੇ ਵਧੇਰੇ ਵਿਆਪਕ ਅਤੇ ਡੂੰਘਾਈ ਵਿੱਚ ਬਣ ਗਈ ਹੈ, ਅਤੇ ਅਣੂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਮਾਰਕੀਟ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਦੌਰ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋ ਗਈ ਹੈ.

ਲੇਖਕ ਮਾਰਕੀਟ ਵਿੱਚ ਆਮ ਅਣੂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਦਾ ਸਾਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ: ਪਹਿਲਾ ਭਾਗ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਦੂਜਾ ਭਾਗ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਦੂਜਾ ਭਾਗ ਕ੍ਰਮ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ।

01

ਭਾਗ I: ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ

ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ

ਪੀਸੀਆਰ (ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਰਿਐਕਸ਼ਨ) 30 ਸਾਲਾਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਦੇ ਇਤਿਹਾਸ ਦੇ ਨਾਲ, ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ।

ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ 1983 ਵਿੱਚ ਕੇਟਸ, ਯੂਐਸਏ ਦੇ ਕੈਰੀ ਮੁਲਿਸ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਮੁਲਿਸ ਨੇ 1985 ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪੇਟੈਂਟ ਲਈ ਅਰਜ਼ੀ ਦਿੱਤੀ ਅਤੇ ਉਸੇ ਸਾਲ ਵਿਗਿਆਨ ਉੱਤੇ ਪਹਿਲਾ ਪੀਸੀਆਰ ਅਕਾਦਮਿਕ ਪੇਪਰ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ।ਮੁਲਿਸ ਨੇ 1993 ਵਿੱਚ ਰਸਾਇਣ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਨੋਬਲ ਪੁਰਸਕਾਰ ਜਿੱਤਿਆ।

ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੂਲ ਸਿਧਾਂਤ

ਪੀਸੀਆਰ ਟੀਚੇ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਮਿਲੀਅਨ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਾਰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਿਧਾਂਤ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਪੇਰੈਂਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਵਰਗੇ ਕਦਮਾਂ ਰਾਹੀਂ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਬੇਟੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪੇਰੈਂਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਪੂਰਕ ਹੈ।

ਮਿਆਰੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਪੜਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ:

1. ਡੀਨੈਚਰੇਸ਼ਨ: ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।DNA ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ (93-98°C) 'ਤੇ ਟੁੱਟ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।

2. ਐਨੀਲਿੰਗ: ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਜੁੜ ਸਕੇ।

3. ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ: ਜਦੋਂ ਤਾਪਮਾਨ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦੇ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਤੋਂ ਪੂਰਕ ਤਾਰਾਂ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੂਰਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਚੱਕਰ ਪੂਰਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੁੱਗਣੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਇਹਨਾਂ ਤਿੰਨਾਂ ਕਦਮਾਂ ਨੂੰ 25-35 ਵਾਰੀ ਰੀਸਪ੍ਰੋਕੇਟ ਕਰਨ ਨਾਲ, ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਧੇਗੀ।

ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਚਤੁਰਾਈ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਜੋ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।

ਹੁਣ ਤੱਕ, ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਸ਼੍ਰੇਣੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਰਥਾਤ ਸਾਧਾਰਨ ਪੀਸੀਆਰ, ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ।

ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਪਹਿਲੀ ਪੀੜ੍ਹੀ

ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਯੰਤਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਸਿਰਫ ਗੁਣਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਹੀ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਪਹਿਲੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਨੁਕਸਾਨ:

- ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ.

-ਪਛਾਣ ਵਿੱਚ ਲੰਮਾ ਸਮਾਂ ਲੱਗਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

-ਸਿਰਫ ਗੁਣਾਤਮਕ ਜਾਂਚ ਹੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।

ਦੂਜੀ-ਪੀੜ੍ਹੀ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਕੁਆਂਟੀਟੇਟਿਵ ਪੀਸੀਆਰ (ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ), ਜਿਸ ਨੂੰ qPCR ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਜਾਂਚਾਂ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੇ ਸੰਚਵ ਦੁਆਰਾ ਐਮਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਸੰਚਵ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਕਰਵ ਦੁਆਰਾ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦਾ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਤੇ ਇਹ C ਦੀ ਸਟੈਂਡਰਡ ਵਕਰ ਅਤੇ ਮੁੱਲ ਦੀ ਮਦਦ ਨਾਲ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।

ਕਿਉਂਕਿ qPCR ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਇੱਕ ਬੰਦ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਖੋਜ ਲਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਹ ਕਲੀਨਿਕਲ ਅਭਿਆਸ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਬਣ ਗਈ ਹੈ।

ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਟਾਕਮੈਨ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜਾਂਚ, ਅਣੂ ਬੀਕਨ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਰੰਗ।

1) ਟਾਕਮੈਨ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲ:

ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਜੋੜਾ ਜੋੜਦੇ ਸਮੇਂ ਇੱਕ ਖਾਸ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜਾਂਚ ਜੋੜੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪੜਤਾਲ ਇੱਕ oligonucleotide ਹੈ, ਅਤੇ ਦੋ ਸਿਰੇ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਇੱਕ ਰਿਪੋਰਟਰ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ ਇੱਕ quencher ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.

ਜਦੋਂ ਪੜਤਾਲ ਬਰਕਰਾਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਰਿਪੋਰਟਰ ਸਮੂਹ ਦੁਆਰਾ ਨਿਕਲਿਆ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਮੂਹ ਦੁਆਰਾ ਲੀਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਟਾਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ 5′-3′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਤੋੜ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਰਿਪੋਰਟਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਮਾਨੀਟਰਿੰਗ ਸਿਸਟਮ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕੇ, ਯਾਨੀ ਕਿ, ਹਰ ਵਾਰ ਐਮਓਸਟ੍ਰੀਫਾਈਡ ਫਾਰਮ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਫਲੂਸੈਂਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਦਾ ਸੰਚਵ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਗਠਨ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਕਾਲੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

2) SYBR ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਰੰਗ:

ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ, SYBR ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਡਾਈ ਦੀ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਜੋੜੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।SYBR ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਡਾਈ ਨੂੰ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਛੱਡਦਾ ਹੈ।SYBR ਡਾਈ ਅਣੂ ਜੋ ਚੇਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਕੋਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਨਹੀਂ ਛੱਡੇਗਾ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ PCR ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਕਾਲੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।SYBR ਸਿਰਫ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਖਾਸ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।

3) ਅਣੂ ਬੀਕਨ

ਇਹ ਇੱਕ ਸਟੈਮ-ਲੂਪ ਡਬਲ-ਲੇਬਲ ਵਾਲੀ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਜਾਂਚ ਹੈ ਜੋ 5 ਅਤੇ 3 ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 8 ਬੇਸਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਦੋਵਾਂ ਸਿਰਿਆਂ 'ਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਪੂਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲਾ ਸਮੂਹ ਤੰਗ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਬੰਦ ਕਰੋ, ਇਹ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਪੈਦਾ ਨਹੀਂ ਕਰੇਗਾ।

ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਉਤਪੰਨ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਅਣੂ ਬੀਕਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਇੱਕ ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜੀਨ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕਵੇਨਚਰ ਜੀਨ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਦੂਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਨੁਕਸਾਨ:

ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਅਜੇ ਵੀ ਘਾਟ ਹੈ, ਅਤੇ ਘੱਟ ਨਕਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਖੋਜ ਸਹੀ ਨਹੀਂ ਹੈ।

ਪਿੱਠਭੂਮੀ ਮੁੱਲ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਤੀਜਾ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਤੀਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ (ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ, ਡੀਪੀਸੀਆਰ, ਡਿਗ-ਪੀਸੀਆਰ) ਅੰਤ-ਬਿੰਦੂ ਖੋਜ ਦੁਆਰਾ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਅਤੇ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਸਟੀਕ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਖੋਜ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਅੰਤਮ ਬਿੰਦੂ ਖੋਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੀਟੀ ਵੈਲਯੂ (ਸਾਈਕਲ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ) 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੁਆਰਾ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਦੇ ਨਾਲ, ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਉੱਚ ਸਟੀਕਤਾ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਇਹ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਦੁਆਰਾ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਮਿਆਰੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਸਹੀ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇੱਕ ਖੋਜ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਹੌਟਸਪੌਟ ਬਣ ਗਿਆ ਹੈ।

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਯੂਨਿਟ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੂਪਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਇਸ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਲੂਡਿਕ, ਚਿੱਪ ਅਤੇ ਬੂੰਦ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ।