Ct ਮੁੱਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਤੀਜਾ ਪੇਸ਼ਕਾਰੀ ਰੂਪ ਹੈ।ਇਹ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਅੰਤਰ ਜਾਂ ਜੀਨ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਾ Ct ਮੁੱਲ ਵਾਜਬ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ?Ct ਮੁੱਲ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵੀ ਰੇਂਜ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾਵੇ?
Ct ਮੁੱਲ ਕੀ ਹੈ?
qPCR ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਸੰਖਿਆ (ਸਾਈਕਲ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ) ਜਦੋਂ ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਸੈੱਟ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ।C ਦਾ ਅਰਥ ਹੈ ਸਾਈਕਲ ਅਤੇ T ਦਾ ਮਤਲਬ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਹੈ।ਸਧਾਰਨ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, Ct ਮੁੱਲ ਉਹਨਾਂ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਹੈ ਜੋ ਕਿ qPCR ਵਿੱਚ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ।ਅਖੌਤੀ "ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਮਾਤਰਾ" ਨੂੰ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਅੱਗੇ ਸਮਝਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ।
Ct ਮੁੱਲ ਕੀ ਕਰਦਾ ਹੈ?
1. ਘਾਤਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ, ਟੈਂਪਲੇਟ ਰਕਮ ਅਤੇ Ct ਮੁੱਲ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ
ਆਦਰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, qPCR ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਗਿਣਤੀ ਦੇ ਚੱਕਰਾਂ ਦੇ ਬਾਅਦ ਘਾਤਕ ਪ੍ਰਸਾਰ ਦੁਆਰਾ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਅਤੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਹੈ: ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ = ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਮਾਤਰਾ × (1+En) ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ।ਹਾਲਾਂਕਿ, qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹਮੇਸ਼ਾ ਇੱਕ ਆਦਰਸ਼ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ "ਨਿਸ਼ਿਚਤ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ" ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸ ਸਮੇਂ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ Ct ਮੁੱਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਘਾਤਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪੀਰੀਅਡ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।Ct ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਮਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ: ਟੈਮਪਲੇਟ ਦੇ Ct ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਟੈਪਲੇਟ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੇ ਲਘੂਗਣਕ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਰੇਖਿਕ ਸਬੰਧ ਹੈ।ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਜਿੰਨੀ ਉੱਚੀ ਹੋਵੇਗੀ, Ct ਮੁੱਲ ਓਨਾ ਹੀ ਛੋਟਾ ਹੋਵੇਗਾ;ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਮਪਲੇਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਜਿੰਨੀ ਘੱਟ ਹੋਵੇਗੀ, Ct ਮੁੱਲ ਓਨਾ ਹੀ ਵੱਡਾ ਹੋਵੇਗਾ।
2. ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ, ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਅਤੇ ਕੁਝ PCR ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ
qPCR ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਸਿੱਧੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਯਾਨੀ, ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ।ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਆਦਰਸ਼ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਛੋਟੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਸੰਚਵ ਛੋਟਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਬੈਕਗ੍ਰਾਉਂਡ ਤੋਂ ਸਪਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵੱਖਰਾ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਉਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਵਧਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਘਾਤਕ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਬਿੰਦੂ 'ਤੇ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਿਰਫ ਘਾਤਕ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ "ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਮਾਤਰਾ" ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਇਸ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸਲਈ, ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਤੀਬਰਤਾ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਹੈ।
ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਅਖੀਰਲੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ, ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਹੁਣ ਘਾਤਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਉਂਦਾ, ਅਤੇ ਰੇਖਿਕ ਪੜਾਅ ਅਤੇ ਪਠਾਰ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
3. Ct ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ
ਜਦੋਂ PCR ਚੱਕਰ Ct ਮੁੱਲ ਦੇ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਹੁਣੇ ਹੀ ਸਹੀ ਘਾਤਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪੀਰੀਅਡ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਇਸ ਸਮੇਂ, ਛੋਟੀ ਗਲਤੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਹੈ, ਇਸਲਈ Ct ਮੁੱਲ ਦੀ ਪੁਨਰ-ਉਤਪਾਦਨਯੋਗਤਾ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਹੈ, ਯਾਨੀ, ਇੱਕੋ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮਿਆਂ 'ਤੇ ਜਾਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ, ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ Ct ਮੁੱਲ ਸਥਿਰ ਹੈ।
1.ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ En
ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਉਸ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ ਜਿਸ ਨਾਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਜੀਨ ਨੂੰ ਐਂਪਲੀਕੋਨ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੋ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 100% ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ En ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਅਗਲੇ ਲੇਖਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਲਈ, ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
| ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਾਰਕ | ਵਿਆਖਿਆ | ਨਿਆਂ ਕਿਵੇਂ ਕਰੀਏ? |
| A. PCR ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ | 1. ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਉਹ ਪਦਾਰਥ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਾਂ ਡਿਟਰਜੈਂਟ।2. ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ cDNA ਵਿੱਚ ਟੈਂਪਲੇਟ RNA ਜਾਂ RT ਰੀਐਜੈਂਟ ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ ਦੀ ਉੱਚ ਤਵੱਜੋ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੀ PCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਵੀ ਰੋਕ ਸਕਦੀ ਹੈ। | 1. A260/A280 ਅਤੇ A260/A230 ਜਾਂ RNA ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਨ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।2. ਕੀ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੀਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਅਨੁਪਾਤ ਅਨੁਸਾਰ ਪੇਤਲਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। |
| B. ਗਲਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ | ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਐਨੀਲ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ ਹਨ | ਪ੍ਰਾਈਮਰ-ਡਾਇਮਰ ਜਾਂ ਹੇਅਰਪਿਨ, ਮੇਲ ਖਾਂਦੀਆਂ, ਅਤੇ ਕਦੇ-ਕਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਡਿਜ਼ਾਈਨਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ। |
| C. ਗਲਤ PCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਡਿਜ਼ਾਈਨ | 1. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਐਨੀਲ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ2. ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਰੀਲੀਜ਼ 3. ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਘਟੀ ਹੈ | 1. ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ TM ਮੁੱਲ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ2. ਪ੍ਰੀ-ਡਿਨੈਚੁਰੇਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ 3. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਹਰੇਕ ਪੜਾਅ ਦਾ ਸਮਾਂ ਬਹੁਤ ਲੰਬਾ ਹੈ |
| D. ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਜਾਂ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਦੀਆਂ ਗਲਤੀਆਂ ਦਾ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਮਿਸ਼ਰਣ | ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ, ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਸਥਾਨਕ ਤਵੱਜੋ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਜਾਂ ਅਸਮਾਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਗੈਰ-ਘਾਤਕ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ | |
| E. ਐਂਪਲੀਕਨ ਲੰਬਾਈ | ਐਂਪਲੀਕਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਬਹੁਤ ਲੰਬੀ ਹੈ, 300bp ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਘੱਟ ਹੈ | ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਐਂਪਲੀਕਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 80-300bp ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੈ |
| F. qPCR ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ | ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘੱਟ ਹੈ ਜਾਂ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਨੁਕੂਲ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟਾਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਪਹੁੰਚਦੀ। | ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੁਆਰਾ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦਾ ਨਿਰਧਾਰਨ |
2. Ct ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਰੇਂਜ
Ct ਮੁੱਲ 15-35 ਤੱਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਜੇਕਰ Ct ਮੁੱਲ 15 ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੇਸਲਾਈਨ ਪੀਰੀਅਡ ਦੀ ਸੀਮਾ ਦੇ ਅੰਦਰ ਹੈ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਤੱਕ ਨਹੀਂ ਪਹੁੰਚਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਆਦਰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੇ Ct ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਲਘੂਗਣਕ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਰੇਖਿਕ ਸਬੰਧ ਹੈ, ਯਾਨੀ, ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ।ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੁਆਰਾ, ਜਦੋਂ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 100% ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੀਨ ਦੇ ਸਿੰਗਲ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਗਣਨਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ Ct ਮੁੱਲ ਲਗਭਗ 35 ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਜੇਕਰ ਇਹ 35 ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ, ਤਾਂ ਟੈਮਪਲੇਟ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਸਿਧਾਂਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ 1 ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਅਰਥਹੀਣ ਮੰਨਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੀਨ ਸੀਟੀ ਰੇਂਜਾਂ ਲਈ, ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਜੀਨ ਲਈ ਇੱਕ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਬਣਾਉਣਾ ਅਤੇ ਜੀਨ ਦੀ ਰੇਖਿਕ ਖੋਜ ਰੇਂਜ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ।
3. Ct ਮੁੱਲ ਦੇ ਕਾਰਕ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨਾ
ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਅਤੇ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਤੋਂ: ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ = ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ × (1+En) ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਇਹ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਆਦਰਸ਼ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਅਤੇ En ਦੀ ਮਾਤਰਾ Ct ਮੁੱਲ 'ਤੇ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਟੈਮਪਲੇਟ ਗੁਣਵੱਤਾ ਜਾਂ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ Ct ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਵੱਡਾ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਬਣਾ ਦੇਵੇਗਾ।
4.Ct ਮੁੱਲ ਬਹੁਤ ਵੱਡਾ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਫਰਵਰੀ-22-2023
