ਪੀਸੀਆਰ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤੀ ਜਾਣ ਵਾਲੀ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਥਰਮਲ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਯੰਤਰਾਂ ਅਤੇ ਉਪਕਰਣਾਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਰਹਿਣ ਦੀਆਂ ਸੀਮਾਵਾਂ ਤੋਂ ਛੁਟਕਾਰਾ ਨਹੀਂ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਕਲੀਨਿਕਲ ਫੀਲਡ ਟੈਸਟਿੰਗ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
1990 ਦੇ ਦਹਾਕੇ ਦੇ ਅਰੰਭ ਤੋਂ, ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਨੇ ਲਗਾਤਾਰ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਉਣ ਵਾਲੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਹੈ ਜਿਸ ਲਈ ਥਰਮਲ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਹੁਣ ਉਹਨਾਂ ਨੇ ਲੂਪ-ਮੀਡੀਏਟਿਡ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਰਿਪਲੇਸਮੈਂਟ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਰੋਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ, ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕ੍ਰਮ ਨਿਰਭਰਤਾ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਅਤੇ ਹੋਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ।
Loop-ਵਿਚੋਲੇ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਿਧਾਂਤ ਇਸ ਤੱਥ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਲਗਭਗ 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂਟੀਗਰੇਡ 'ਤੇ ਇੱਕ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਸੰਤੁਲਨ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਕੋਈ ਵੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਬੇਸ-ਪੇਅਰਡ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਪੂਰਕ ਹਿੱਸੇ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਦੂਜਾ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਵੱਖ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਬਣ ਜਾਵੇਗਾ।
ਇਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ, ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ-ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਨ ਲਈ 4 ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਸਟ੍ਰੈਂਡ-ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਲਗਾਤਾਰ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
ਪਹਿਲਾਂ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ 'ਤੇ 6 ਖਾਸ ਖੇਤਰਾਂ F3, F2, F1, B1, B2, B3 ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇਹਨਾਂ 6 ਖਾਸ ਖੇਤਰਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ 4 ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰੋ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੇਠਾਂ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ):
ਫਾਰਵਰਡ ਇਨਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (FIP) F1c ਅਤੇ F2 ਨਾਲ ਬਣਿਆ ਹੈ।
ਪਿਛਲਾ ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (BIP) B1c ਅਤੇ B2 ਨਾਲ ਬਣਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ TTTT ਮੱਧ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਪੇਸਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਬਾਹਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ F3 ਅਤੇ B3 ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ 'ਤੇ F3 ਅਤੇ B3 ਖੇਤਰਾਂ ਦੇ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
LAMP ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ, ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਾਹਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨਾਲੋਂ ਕਈ ਗੁਣਾ ਹੈ।ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਪੂਰਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਬਾਹਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨਾਲ ਜੋੜ ਕੇ ਇੱਕ DNA ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।BstDNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੁਆਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਪੂਰਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਪੂਰਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਡੰਬਲ ਬਣਤਰ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਡੰਬਲ ਬਣਤਰ ਡੀਐਨਏ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਇੱਕ ਖੁੱਲੇ ਸਿਰੇ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਸਟੈਮ-ਲੂਪ ਬਣਤਰ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਨਿਰੰਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਨਮੂਨੇ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਅੰਦਰੂਨੀ ਅਤੇ ਬਾਹਰੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਸਟੈਮ-ਲੂਪ ਬਣਤਰ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਲਗਾਤਾਰ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਤੋਂ ਗੁਜ਼ਰਨ ਲਈ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ ਕਈ ਸਟੈਮ-ਲੂਪ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਡੀਐਨਏ ਮਿਸ਼ਰਣ.
ਲੂਪ-ਮੀਡੀਏਟਿਡ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਫਾਇਦੇ ਅਤੇ ਨੁਕਸਾਨ
LAMP ਦੇ ਫਾਇਦੇ:
(1) ਉੱਚ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ, ਜੋ 1 ਘੰਟੇ ਦੇ ਅੰਦਰ ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਦੀਆਂ 1-10 ਕਾਪੀਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਨਾਲੋਂ 10-100 ਗੁਣਾ ਹੈ।
(2) ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਮਜ਼ਬੂਤ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਪਕਰਣ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ.
LAMP ਦੀਆਂ ਕਮੀਆਂ:
(1) ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਲਈ ਲੋੜਾਂ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚੀਆਂ ਹਨ।
(2) ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਲੋਨਿੰਗ ਅਤੇ ਕ੍ਰਮ ਲਈ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ, ਪਰ ਸਿਰਫ ਨਿਰਣੇ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
(3) ਇਸਦੀ ਮਜ਼ਬੂਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਐਰੋਸੋਲ ਬਣਾਉਣਾ ਆਸਾਨ ਹੈ, ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
Sਟਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ (SDA) ਇੱਕ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ 1992 ਵਿੱਚ ਅਮਰੀਕੀ ਵਿਦਵਾਨ ਵਾਕਰ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।
SDA ਦੀ ਮੁਢਲੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼, ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਦੋ ਜੋੜੇ, ਡੀਐਨਟੀਪੀ, ਅਤੇ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਅਤੇ ਮੈਗਨੀਸ਼ੀਅਮ ਆਇਨ ਅਤੇ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।
ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਿਧਾਂਤ ਟੀਚੇ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਦੋਵਾਂ ਸਿਰਿਆਂ 'ਤੇ ਰਸਾਇਣਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੀ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਮਾਨਤਾ ਕ੍ਰਮ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਆਪਣੀ ਪਛਾਣ ਵਾਲੀ ਥਾਂ 'ਤੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਵਿਚਲੇ ਪਾੜੇ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ 3′ ਅੰਤ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਗਲੇ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ।
ਡੀਐਨਏ ਦੀਆਂ ਬਦਲੀਆਂ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਲਗਾਤਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡਿਸਪਲੇਸਮੈਂਟ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੇ ਫਾਇਦੇ ਅਤੇ ਨੁਕਸਾਨ
SDA ਦੇ ਫਾਇਦੇ:
ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਉੱਚ ਹੈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਮਾਂ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਮਜ਼ਬੂਤ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਪਕਰਣ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ.
SDA ਦੀਆਂ ਕਮੀਆਂ:
ਉਤਪਾਦ ਇਕਸਾਰ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਕੁਝ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਉਤਪਾਦ ਹਮੇਸ਼ਾ SDA ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜੇ ਜਾਣ 'ਤੇ ਟੇਲਿੰਗ ਲਾਜ਼ਮੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਾਪਰਦੀ ਹੈ।
Rਓਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ
ਰੋਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ (ਆਰ.ਸੀ.ਏ.) ਰੋਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਦੁਆਰਾ ਜਰਾਸੀਮ ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਦੀ ਵਿਧੀ 'ਤੇ ਡਰਾਇੰਗ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਹੈ।ਇਹ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਸਰਕੂਲਰ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਫਾਈ 29)) ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਰੋਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਡੀਐਨਏ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ।
ਆਰਸੀਏ ਨੂੰ ਲੀਨੀਅਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਐਕਸਪੋਨੈਂਸ਼ੀਅਲ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਲੀਨੀਅਰ ਆਰਸੀਏ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 10 ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਸਕਦੀ ਹੈ5ਵਾਰ, ਅਤੇ ਘਾਤਕ RCA ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 10 ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਸਕਦੀ ਹੈ9ਵਾਰ
ਸਧਾਰਨ ਅੰਤਰ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੇਠਾਂ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਲੀਨੀਅਰ ਐਂਪਲੀਫ਼ਿਕੇਸ਼ਨ a ਸਿਰਫ਼ 1 ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਐਕਸਪੋਨੈਂਸ਼ੀਅਲ ਐਂਪਲੀਫ਼ਿਕੇਸ਼ਨ b ਵਿੱਚ 2 ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਹਨ।
ਲੀਨੀਅਰ ਆਰਸੀਏ ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਆਰਸੀਏ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੁਆਰਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਉਤਪਾਦ ਇੱਕ ਰੇਖਿਕ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਲੂਪ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਹਜ਼ਾਰਾਂ ਗੁਣਾ ਦੁਹਰਾਉਣ ਵਾਲੇ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਕਿਉਂਕਿ ਲੀਨੀਅਰ ਆਰਸੀਏ ਦਾ ਉਤਪਾਦ ਹਮੇਸ਼ਾ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਸਿਗਨਲ ਦਾ ਆਸਾਨ ਫਿਕਸੇਸ਼ਨ ਇੱਕ ਵੱਡਾ ਫਾਇਦਾ ਹੈ।
ਐਕਸਪੋਨੈਂਸ਼ੀਅਲ ਆਰਸੀਏ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਹਾਈਪਰ ਬ੍ਰਾਂਚਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਐਚਆਰਸੀਏ (ਹਾਈਪਰ ਬ੍ਰਾਂਚਡ ਆਰਸੀਏ) ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਐਕਸਪੋਨੈਂਸ਼ੀਅਲ ਆਰਸੀਏ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਆਰਸੀਏ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਦੂਜਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਆਰਸੀਏ ਉਤਪਾਦ ਨਾਲ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਸਤਾਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਰਿਪਲੇਸਮੈਂਟ ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਆਰਸੀਏ ਉਤਪਾਦ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਰਿਪਲੇਸਮੈਂਟ ਆਰਸੀਏ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦੁਹਰਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਰੋਲਿੰਗ ਸਰਕਲ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਫਾਇਦੇ ਅਤੇ ਨੁਕਸਾਨ
RCA ਦੇ ਫਾਇਦੇ:
ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਚੰਗੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਆਸਾਨ ਓਪਰੇਸ਼ਨ.
ਆਰਸੀਏ ਦੀਆਂ ਕਮੀਆਂ:
ਸਿਗਨਲ ਖੋਜ ਦੌਰਾਨ ਪਿਛੋਕੜ ਦੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ।ਆਰਸੀਏ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਅਨਸਰਕੂਲੇਟਡ ਪੈਡਲੌਕ ਜਾਂਚ ਅਤੇ ਅਨਬਾਉਂਡ ਜਾਂਚ ਦਾ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਜਾਂ ਆਰਐਨਏ ਕੁਝ ਪਿਛੋਕੜ ਸੰਕੇਤ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
Nucleicacid ਕ੍ਰਮ-ਅਧਾਰਿਤ ਪ੍ਰਸਾਰਣ
ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕ੍ਰਮ-ਅਧਾਰਿਤ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ (NASBA) ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਇਹ ਇੱਕ ਨਿਰੰਤਰ ਅਤੇ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ T7 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਜੋੜੀ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਦੇਸ਼ਤ ਹੈ।ਇਹ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਟੈਂਪਲੇਟ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਲਗਭਗ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 109 ਗੁਣਾ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਰਵਾਇਤੀ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿਧੀ ਨਾਲੋਂ 1000 ਗੁਣਾ ਵੱਧ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਉਪਕਰਣਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਇਸ ਤਕਨੀਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੇ ਸਾਹਮਣੇ ਆਉਂਦੇ ਹੀ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਨਿਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਕੰਪਨੀਆਂ ਇਸ ਸਮੇਂ ਆਰਐਨਏ ਖੋਜ ਕਿੱਟਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।
ਹਾਲਾਂਕਿ RNA ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵੀ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਨਾਸਬਾ ਦੇ ਆਪਣੇ ਫਾਇਦੇ ਹਨ: ਇਹ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਸਥਿਰ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਰਵਾਇਤੀ ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਸਥਿਰ ਅਤੇ ਸਹੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ 41 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ AMV (ਏਵੀਅਨ ਮਾਈਲੋਬਲਾਸਟੋਸਿਸ ਵਾਇਰਸ) ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, RNase H, T7 RNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਜੋੜੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ:
ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ T7 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਦਾ ਪੂਰਕ ਕ੍ਰਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ RNA ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨਾਲ ਜੁੜ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ AMV ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੁਆਰਾ ਇੱਕ DNA-RNA ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
RNase H ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਵਿੱਚ RNA ਨੂੰ ਹਜ਼ਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ DNA ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।
ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ AMV ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ, T7 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ ਵਾਲਾ ਇੱਕ DNA ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬਣਦਾ ਹੈ।
T7 RNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪੂਰੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਟੀਚਾ RNA ਪੈਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਨਾਸਬਾ ਦੇ ਫਾਇਦੇ:
(1) ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ T7 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ ਹੈ, ਪਰ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਕੋਈ T7 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਕ੍ਰਮ ਨਹੀਂ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਨਹੀਂ ਜਾ ਸਕਦਾ, ਇਸਲਈ ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ।
(2) NASBA ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਲਟ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਸਮਾਂ ਛੋਟਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਨਾਸਬਾ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ:
(1) ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਵਧੇਰੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
(2) ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਲਾਗਤ ਨੂੰ ਉੱਚਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਤਿੰਨ ਕਿਸਮ ਦੇ ਪਾਚਕ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਅਗਸਤ-06-2021
