ਪੀਸੀਆਰ (ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਰਿਐਕਸ਼ਨ) ਇਨ-ਵਿਟਰੋ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਇਤਿਹਾਸ 30 ਸਾਲਾਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ।

ਪੀਸੀਆਰ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ 1983 ਵਿੱਚ ਕੇਟਸ, ਯੂਐਸਏ ਦੇ ਕੈਰੀ ਮੂਲਿਸ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਮੁਲਿਸ ਨੇ 1985 ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪੇਟੈਂਟ ਲਈ ਅਰਜ਼ੀ ਦਿੱਤੀ ਅਤੇ ਉਸੇ ਸਾਲ ਵਿਗਿਆਨ ਉੱਤੇ ਪਹਿਲਾ ਪੀਸੀਆਰ ਅਕਾਦਮਿਕ ਪੇਪਰ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ।ਮੁਲਿਸ ਨੂੰ ਉਸਦੇ ਕੰਮ ਲਈ 1993 ਵਿੱਚ ਰਸਾਇਣ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਨੋਬਲ ਪੁਰਸਕਾਰ ਨਾਲ ਸਨਮਾਨਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੂਲ ਸਿਧਾਂਤ

ਪੀਸੀਆਰ ਟੀਚੇ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਮਿਲੀਅਨ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਾਰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਸਿਧਾਂਤ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਦੇ ਅਧੀਨ ਹੈ, ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਪੇਰੈਂਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਵਜੋਂ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ।ਇਹ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਐਨੀਲਿੰਗ, ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਵਰਗੇ ਕਦਮਾਂ ਰਾਹੀਂ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਬੇਟੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪੇਰੈਂਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਲਈ ਪੂਰਕ ਹੈ।

ਮਿਆਰੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਪੜਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ:

1. ਡੈਨੇਟਰੇਸ਼ਨ: ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਬਾਂਡ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ (93-98℃) 'ਤੇ ਟੁੱਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

2. ਐਨੀਲਿੰਗ: ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰੋ ਤਾਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕੇ।

3. ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ: ਜਦੋਂ ਤਾਪਮਾਨ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਡੀਐਨਏ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਤੋਂ ਪੂਰਕ ਤਾਰਾਂ ਦਾ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੂਰਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਚੱਕਰ ਪੂਰਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੁੱਗਣੀ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ

ਇਹਨਾਂ ਤਿੰਨਾਂ ਕਦਮਾਂ ਨੂੰ 25-35 ਵਾਰੀ ਰੀਸਪ੍ਰੋਕੇਟ ਕਰਨ ਨਾਲ, ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਧੇਗੀ।

ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਚਤੁਰਾਈ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਜੋ ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।

ਹੁਣ ਤੱਕ, ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਸ਼੍ਰੇਣੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਰਥਾਤ ਸਾਧਾਰਨ ਪੀਸੀਆਰ, ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਅਤੇ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ।

ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਪਹਿਲੀ ਪੀੜ੍ਹੀ

ਟੀਚੇ ਦੇ ਜੀਨ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਯੰਤਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਸਿਰਫ ਗੁਣਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਹੀ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਪਹਿਲੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਨੁਕਸਾਨ:

1. ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ.

2. ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਵਿੱਚ ਲੰਮਾ ਸਮਾਂ ਲੱਗਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

3. ਸਿਰਫ਼ ਗੁਣਾਤਮਕ ਟੈਸਟ ਹੀ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ

ਦੂਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦਾ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ, ਜਿਸਨੂੰ ਕਿਯੂਪੀਸੀਆਰ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੇ ਸੰਚਵ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਇਕੱਤਰ ਹੋਣ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਕਰਵ ਦੁਆਰਾ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦਾ ਨਿਰਣਾ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸਨੂੰ Cq ਮੁੱਲ ਅਤੇ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਮਦਦ ਨਾਲ ਮਿਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਕਿਉਂਕਿ qPCR ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਇੱਕ ਬੰਦ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਖੋਜ ਲਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਹ ਕਲੀਨਿਕਲ ਅਭਿਆਸ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਬਣ ਗਈ ਹੈ।

ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਟਾਕਮੈਨ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲ, ਅਣੂ ਬੀਕਨ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਡਾਈ।

1) TaqMan ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲ:

ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਇੱਕ ਜੋੜਾ ਜੋੜਦੇ ਸਮੇਂ ਇੱਕ ਖਾਸ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜਾਂਚ ਜੋੜੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪੜਤਾਲ ਇੱਕ oligonucleotide ਹੈ, ਅਤੇ ਦੋਨੋ ਸਿਰੇ ਇੱਕ ਰਿਪੋਰਟਰ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ ਇੱਕ Quencher ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.

ਜਦੋਂ ਪੜਤਾਲ ਬਰਕਰਾਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਰਿਪੋਰਟਰ ਸਮੂਹ ਦੁਆਰਾ ਨਿਕਲਿਆ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਮੂਹ ਦੁਆਰਾ ਲੀਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਟਾਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ 5′-3′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਤੋੜ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਰਿਪੋਰਟਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਮਾਨੀਟਰਿੰਗ ਸਿਸਟਮ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕੇ, ਯਾਨੀ ਕਿ, ਹਰ ਵਾਰ ਐਮਓਸਟ੍ਰੀਫਾਈਡ ਫਾਰਮ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਫਲੂਸੈਂਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਦਾ ਸੰਚਵ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੇ ਗਠਨ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਕਾਲੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

2) SYBR ਫਲੋਰਸੈਂਟ ਡਾਈ:

ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ, SYBR ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਡਾਈ ਦੀ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਜੋੜੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।SYBR ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਡਾਈ ਨੂੰ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਛੱਡਦਾ ਹੈ।SYBR ਡਾਈ ਅਣੂ ਜੋ ਚੇਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਕੋਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਨਹੀਂ ਛੱਡੇਗਾ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ PCR ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਕਾਲੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।SYBR ਸਿਰਫ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੀ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਖਾਸ ਹੈ ਜਾਂ ਨਹੀਂ।

3) ਅਣੂ ਬੀਕਨ:

ਇਹ ਇੱਕ ਸਟੈਮ-ਲੂਪ ਡਬਲ-ਲੇਬਲ ਵਾਲੀ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਜਾਂਚ ਹੈ ਜੋ 5 ਅਤੇ 3 ਸਿਰੇ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 8 ਬੇਸਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਦੋਵਾਂ ਸਿਰਿਆਂ 'ਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਪੂਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੋੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲਾ ਸਮੂਹ ਤੰਗ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਬੰਦ ਕਰੋ, ਕੋਈ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਪੈਦਾ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇਗਾ।

ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਉਤਪੰਨ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਐਨੀਲਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਅਣੂ ਬੀਕਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਇੱਕ ਖਾਸ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਜੀਨ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕਵੇਨਚਰ ਜੀਨ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਦੂਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਨੁਕਸਾਨ:

ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਅਜੇ ਵੀ ਕਮੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਘੱਟ ਨਕਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਖੋਜ ਗਲਤ ਹੈ।

ਪਿਛੋਕੜ ਮੁੱਲ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਤੀਜਾ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ.

ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਆਰ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਖੋਜ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ.

ਤੀਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀ.ਸੀ.ਆਰ

ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ (ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ, ਡੀਪੀਸੀਆਰ, ਡਿਗ-ਪੀਸੀਆਰ) ਅੰਤ-ਬਿੰਦੂ ਖੋਜ ਦੁਆਰਾ ਟੀਚੇ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਕਾਪੀ ਨੰਬਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਅਤੇ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਸਟੀਕ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਖੋਜ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਅੰਤ-ਬਿੰਦੂ ਖੋਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੀਟੀ ਵੈਲਯੂ (ਸਾਈਕਲ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ) 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਐਮਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੁਆਰਾ ਘੱਟ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਦੇ ਨਾਲ, ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਉੱਚ ਸਟੀਕਤਾ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਇਹ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਦੁਆਰਾ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਮਿਆਰੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਸਹੀ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇੱਕ ਖੋਜ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਹੌਟਸਪੌਟ ਬਣ ਗਿਆ ਹੈ।

ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਯੂਨਿਟ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੂਪਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਇਸ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਮੁੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਲੂਡਿਕ, ਚਿੱਪ ਅਤੇ ਬੂੰਦ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ।

1) ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਲੂਇਡਿਕ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ, ਐਮਡੀਪੀਸੀਆਰ:

ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਲੂਇਡਿਕ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਮਾਈਕ੍ਰੋਫਲੂਇਡਿਕ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਮੂਨੇ ਨੈਨੋ-ਅੱਪਗਰੇਡ ਜਾਂ ਛੋਟੀਆਂ ਬੂੰਦਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਮਹਿਸੂਸ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਪਰ ਬੂੰਦਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਵਿਧੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।mdPCR ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹੋਰ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਅਪਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।

2) ਬੂੰਦ-ਆਧਾਰਿਤ ਡਿਜੀਟਲ PCR, ddPCR:

ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਬੂੰਦਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਸੈਸ ਕਰਨ ਲਈ ਵਾਟਰ-ਇਨ-ਆਇਲ ਡਰਾਪਲੇਟ ਜਨਰੇਸ਼ਨ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂਆਂ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਹਜ਼ਾਰਾਂ ਨੈਨੋਸਕੇਲ ਬੂੰਦਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡੋ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਖੋਜੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਟਾਰਗੇਟ ਅਣੂ ਸ਼ਾਮਲ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਜਾਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਤੋਂ ਕਈ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਟਾਰਗੇਟ ਅਣੂ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।

3) ਚਿੱਪ-ਅਧਾਰਿਤ ਡਿਜੀਟਲ PCR, cdPCR:

ਸਿਲਿਕਨ ਵੇਫਰਾਂ ਜਾਂ ਕੁਆਰਟਜ਼ ਸ਼ੀਸ਼ੇ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਾਂ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਕੈਵਿਟੀਜ਼ ਨੂੰ ਉੱਕਰੀ ਕਰਨ ਲਈ ਏਕੀਕ੍ਰਿਤ ਤਰਲ ਮਾਰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਾਲਵ ਦੁਆਰਾ ਘੋਲ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਡਿਜੀਟਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਤਰਲ ਨੂੰ ਉਸੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨੈਨੋਮੀਟਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡੋ।

ਤੀਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੇ ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਨੁਕਸਾਨ:

ਸਾਜ਼ੋ-ਸਾਮਾਨ ਅਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟ ਮਹਿੰਗੇ ਹਨ।

ਟੈਂਪਲੇਟ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਉੱਚੀਆਂ ਹਨ।ਜੇਕਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਿਸਟਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਮਾਪਣਾ ਅਸੰਭਵ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਇਹ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਮਾਪਣ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਘੱਟ ਜਾਵੇਗੀ।

ਜਦੋਂ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਾਧਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਵੀ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।