ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਬਰਦਾਸ਼ਤ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੇ (MMLV ਗਤੀਵਿਧੀ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਤਾਪਮਾਨ 37-50°C ਹੈ, ਅਤੇ AMV 42-60°C ਹੈ)।ਵਧੇਰੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਵਾਇਰਲ RNA ਨੂੰ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ cDNA ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਉਲਟਾ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਖੋਜ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆਉਂਦੀ ਹੈ।ਰਵਾਇਤੀ RT-qPCR ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੋ ਮੁੱਖ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ (ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼) ਦੀ ਭਾਗੀਦਾਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਸੰਚਾਲਨ ਨੂੰ ਸਰਲ ਬਣਾਉਣਾ ਅਤੇ ਲਾਗਤ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ ਅਸੰਭਵ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇੱਥੇ ਅਸੀਂ ਦੋ ਉੱਚ-ਤਾਪਮਾਨ-ਰੋਧਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, TtH ਅਤੇ RevTaq ਪੇਸ਼ ਕਰਾਂਗੇ।ਇਹਨਾਂ ਦੋ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦਾ ਕੰਮ ਵੀ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਦੋ-ਪੱਖੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

TtH DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼

ਤੁਸੀਂ TtH ਬਾਰੇ ਸੁਣਿਆ ਹੋਵੇਗਾ, ਜੋ ਕਿ ਥਰਮੋਫਿਲਿਕ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਥਰਮਸ ਥਰਮੋਫਿਲਸ HB8 ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।Mg2+ ਵਰਗੀਆਂ ਡਾਇਵਲੈਂਟ ਕੈਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਤਾਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਰਗੀਆਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਸ ਵਿੱਚ ਤਾਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲੋਂ ਉੱਚ ਤਾਪ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਹ ਉੱਚ ਜੀਸੀ ਸਮੱਗਰੀ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਪੀਸੀਆਰ 'ਤੇ ਵੀ ਵਧੀਆ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ।

· ਇਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਿੱਚ ਮੂਲ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਕੋਈ 3′→5′ exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ 5′→3′ exonuclease ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਸਨੂੰ ਡੀਡੀਓਕਸੀ ਕ੍ਰਮ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

· ਇਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਿੱਚ RTase ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।Mn2+ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, RTase ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ।ਇਸ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਉਸੇ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਯਾਨੀ ਇੱਕ-ਕਦਮ RT-PCR।ਹਾਲਾਂਕਿ, Mn2+ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, RT-PCR ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਹੀਂ ਹੈ।RT ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ rnaase H ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਾਲ ਕੋਈ ਲੈਣਾ-ਦੇਣਾ ਨਹੀਂ ਹੈ।

· Tth-DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ (pH9, ਸਰਵੋਤਮ +55℃～+70℃, ਅਧਿਕਤਮ +95℃) ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਗਤੀਵਿਧੀ RNA ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ CDNA ਨੂੰ Mg2+ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ ਉਸੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨਾਲ PCR ਦੁਆਰਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

· ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰਨ ਲਈ Tth-DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਇਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਮਾਤਰਾਤਮਕ RT-PCR, ਕਲੋਨਿੰਗ, ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਅਤੇ ਵਾਇਰਲ RNA ਦੇ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਉਪਯੋਗੀ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।
· Tth-DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ RT-PCR ਲਈ RNA ਨੂੰ 1kb ਤੱਕ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਫਾਇਦੇ

Tth ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼:

• ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰੋ ਕਿ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਚੇਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ (ਪੀਸੀਆਰ) ਉਤਪਾਦ ਦਾ ਆਕਾਰ, ਆਰਟੀ-ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਘੱਟੋ ਘੱਟ 1000 ਬੀ.ਪੀ.

• ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਡੀਆਕਸਾਈਰੀਬੋਨਿਊਕਲੀਓਸਾਈਡ ਟ੍ਰਾਈਫਾਸਫੇਟ ਨੂੰ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਜੋਂ ਸਵੀਕਾਰ ਕਰੋ

• RNase H ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਨਹੀਂ ਹੈ

• ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ ਉੱਚ ਥਰਮਲ ਸਥਿਰਤਾ ਹੈ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਉੱਚ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ

RevTaq RT-PCR DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼

ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਗਰਮੀ-ਰੋਧਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼

RevTaq-RT-PCR-DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਇੱਕ ਇੰਜਨੀਅਰਡ, ਬਹੁਤ ਹੀ ਗਰਮੀ-ਰੋਧਕ, ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਨਾਲ ਦੋਹਰਾ-ਫੰਕਸ਼ਨਲ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੈ ਜੋ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਅਤੇ ਨਕਲੀ ਵਿਕਾਸ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

· 95°C 'ਤੇ RevTaq RT-PCR DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦਾ ਅੱਧਾ ਜੀਵਨ 40 ਮਿੰਟਾਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ।

· RevTaq RT-PCR DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ RNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਤੋਂ ਸਿੱਧੇ ਉੱਚ-ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਹੋਰ cDNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਨੂੰ ਕਈ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

· RevTaq RT-PCR DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ "ਜ਼ੀਰੋ-ਸਟੈਪ" RT-PCR (ਕੋਈ ਆਈਸੋਥਰਮਲ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਨਹੀਂ) ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਚੱਕਰਵਾਤੀ PCR ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਵਿੱਚ, ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਵੀ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ RNA ਵਿੱਚ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚੇ ਨੂੰ ਪਿਘਲਣ ਵਿੱਚ ਆਈਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

· ਐਪਟੈਮਰ-ਅਧਾਰਿਤ ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਜਦੋਂ ਐਨੀਲਿੰਗ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਤਾਪਮਾਨ 57 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ RevTaq RT-PCR DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਵਧੀਆ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗਾ।

· ਕਿਉਂਕਿ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਰਮੀ-ਰੋਧਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਬਹੁਤ ਉੱਚੇ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੇ ਬਿੰਦੂਆਂ (>60°C) ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲਾਂ ਨੂੰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

· ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸੈੱਟਅੱਪ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਤਾਪਮਾਨ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਦੁਆਰਾ ਐਨੀਲਿੰਗ/ਐਕਸਟੇਂਸ਼ਨ ਪੜਾਅ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

· ਤਾਪਮਾਨ ਜਿੰਨਾ ਉੱਚਾ ਹੋਵੇਗਾ, ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਉਨੀ ਹੀ ਵੱਧ ਹੋਵੇਗੀ।ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਚੱਕਰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਨਾਲੋਂ ਉੱਚੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ:ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ:ਸੀਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੁਪਲੈਕਸ ਨਾਲੋਂ ਉੱਚਾ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲਾ ਬਿੰਦੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

· RevTaq RT-PCR DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਂਪਲੀਕਨ ਦਾ ਆਕਾਰ 60-300 bp ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੈ।

RevTaq RT-PCR DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਖੋਜ ਸੀਮਾ 4 ਕਾਪੀਆਂ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦੀ ਹੈ/

ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ (ਉੱਚ ਪਿਘਲਣ ਵਾਲੇ ਬਿੰਦੂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਸਥਾਪਨਾ) ਨੂੰ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।RevTaq RT-PCR DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼-ਚਲਾਏ RT-PCR TaqPath 1-ਕਦਮ RT-qPCR ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਅਤੇ ਹੇਠਲੇ ਖੋਜ ਨਮੂਨਾ ਪਤਲਾ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਨਾਲੋਂ ਬਿਹਤਰ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਹੋਰ ਫਾਇਦੇ:

ਤੇਜ਼ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਫੰਕਸ਼ਨ → ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਥਰਮਲ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਛੱਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਐਪਟੈਮਰ ਫਾਰਮੂਲਾ → ਤੁਰੰਤ 100% ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੋ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ (<57°C) 'ਤੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਰੋਕੋ।

ਕਲੀਵੇਜ ਫੰਕਸ਼ਨ → ਆਰਐਨਏ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ RevTaq RT-PCR DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਕੱਚੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵੀ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਗਰਮ RT-PCR ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਯੂਕੇਰੀਓਟਸ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਵਾਇਰਸਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਨਸ਼ਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

IVD ਕੱਚੇ ਮਾਲ ਦਾ ਪੱਧਰ → ਉੱਚ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੇ ਮਿਆਰ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਹੀ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਾਲੀਆਂ ਕੀਮਤਾਂ