ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਕੁਆਂਟੀਟੇਟਿਵ ਪੀਸੀਆਰ (ਜਿਸਨੂੰ ਟਾਕਮੈਨ ਪੀਸੀਆਰ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਫਕਿਊ-ਪੀਸੀਆਰ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ) ਸੰਯੁਕਤ ਰਾਜ ਵਿੱਚ ਪੀਈ (ਪਰਕਿਨ ਐਲਮਰ) ਦੁਆਰਾ 1995 ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਤ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਹੈ। ਇਹ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਬਸ ਜੋੜ ਕੇ ਰਵਾਇਤੀ ਪੀਸੀਆਰ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ।ਲਚਕੀਲੇ PCR ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, FQ-PCR ਦੇ ਇਸਦੇ ਗਿਣਾਤਮਕ ਕਾਰਜ ਨੂੰ ਮਹਿਸੂਸ ਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਫਾਇਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਲੇਖ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ, ਸਿਧਾਂਤਾਂ, ਤਰੀਕਿਆਂ ਅਤੇ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਦਾ ਸੰਖੇਪ ਵਰਣਨ ਕਰਨ ਦਾ ਇਰਾਦਾ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।

1 ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ

FQ-PCR ਵਿੱਚ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਸਾਧਾਰਨ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ, ਇਹ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਫੋਟੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਸੰਚਾਲਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੁਆਰਾ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਦੇ ਬਦਲਾਅ ਦਾ ਸਿੱਧਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਰਵਾਇਤੀ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀਆਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਕਮੀਆਂ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਇਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਡੀਐਨਏਸੀਪੀਆਰਸੀ ਅਤੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵੀ ਹੈ।

ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਆਮ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਐਗਰੋਜ਼ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਅਤੇ ਐਥੀਡੀਅਮ ਬਰੋਮਾਈਡ ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੂੰ ਅਲਟਰਾਵਾਇਲਟ ਰੋਸ਼ਨੀ ਨਾਲ ਜਾਂ ਪੌਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਅਤੇ ਸਿਲਵਰ ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਦੇਖਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਕਈ ਯੰਤਰਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਸਮਾਂ ਅਤੇ ਮਿਹਨਤ ਵੀ ਲੱਗਦੀ ਹੈ।Ethidium ਬਰੋਮਾਈਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੇ ਗਏ ਧੱਬੇ ਮਨੁੱਖੀ ਸਰੀਰ ਲਈ ਨੁਕਸਾਨਦੇਹ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਅਤੇ ਝੂਠੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਹੋਣ ਦੇ ਮੌਕੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, FQ-PCR ਨੂੰ ਨਮੂਨਾ ਲੋਡ ਕਰਨ ਦੌਰਾਨ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਵਾਰ ਢੱਕਣ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬੰਦ-ਟਿਊਬ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ PCR ਪੋਸਟ-ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਪੀਸੀਆਰ ਓਪਰੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਕਮੀਆਂ ਤੋਂ ਬਚਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ PE ਕੰਪਨੀ ਦੁਆਰਾ ਵਿਕਸਤ ABI7100 PCR ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਯੰਤਰ ਦੀਆਂ ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ: ① ਵਿਆਪਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ: ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਖੋਜ, ਜਰਾਸੀਮ ਖੋਜ, ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।② ਵਿਲੱਖਣ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਸਿਧਾਂਤ: ਫਲੋਰੋਸੈਂਟਲੀ ਲੇਬਲ ਵਾਲੀਆਂ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਲੇਜ਼ਰ ਐਕਸਾਈਟੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਦੇ ਨਾਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਇਕੱਠੀ ਹੋ ਜਾਵੇਗੀ, ਤਾਂ ਜੋ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ।③ ਉੱਚ ਕਾਰਜ ਕੁਸ਼ਲਤਾ: ਬਿਲਟ-ਇਨ 9600 ਪੀਸੀਆਰ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ, ਕੰਪਿਊਟਰ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ 1 ਤੋਂ 2 ਘੰਟੇ ਤੱਕ 96 ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸਵੈਚਲਿਤ ਅਤੇ ਸਮਕਾਲੀ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਵਧਾਉਣ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ।④ ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ: ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰਨ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਸਿਰਫ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧੇ ਖੋਜਣ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਜਾਂਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।⑤ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨਹੀਂ: ਵਿਲੱਖਣ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਾਲ ਨੱਥੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬ ਅਤੇ ਫੋਟੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਸੰਚਾਲਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਅਪਣਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਬਾਰੇ ਚਿੰਤਾ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।⑥ਨਤੀਜੇ ਮੁੜ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਯੋਗ ਹਨ: ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਰੇਂਜ ਤੀਬਰਤਾ ਦੇ ਪੰਜ ਆਰਡਰ ਤੱਕ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਵਿਗਿਆਨਕ ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਦੁਆਰਾ ਮਹੱਤਵ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.

2 ਸਿਧਾਂਤ ਅਤੇ ਢੰਗ

FQ-PCR ਦਾ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਸਿਧਾਂਤ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਫਲੋਰਸੈਂਟਲੀ ਲੇਬਲ ਵਾਲੀ ਪੜਤਾਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ Taq ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ 5′→3′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਹੈ।ਪ੍ਰੋਬ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨਾਲ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਪੜਤਾਲ ਦੇ 5′ਸਿਰੇ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਐਮੀਸ਼ਨ ਜੀਨ FAM (6-ਕਾਰਬੋਕਸਾਈਫਲੋਰੇਸੀਨ, 518nm 'ਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਐਮੀਸ਼ਨ ਪੀਕ) ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ 3′ਅੰਤ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਕੁਇੰਚਿੰਗ ਗਰੁੱਪ ਟੈਮਰਾ (6-ਕਾਰਬੋਕਸੀਟ੍ਰੇਮਾਈਥਾਈਲਰੋਮਾਈਨ, 518nm 'ਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਐਮੀਸ਼ਨ ਪੀਕ), ਜਾਂਚ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਤੋਂ ਰੋਕਣ ਲਈ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਪੜਤਾਲ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਵੇਨਚਰ ਗਰੁੱਪ ਐਮੀਟਿੰਗ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਨਿਕਾਸੀ ਨੂੰ ਦਬਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਇੱਕ ਵਾਰ ਨਿਕਾਸੀ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਮੂਹ ਤੋਂ ਵੱਖ ਹੋ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਰੋਕ ਹਟਾ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ 518nm 'ਤੇ ਆਪਟੀਕਲ ਘਣਤਾ ਵਧ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਖੋਜ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪੁਨਰ-ਨਿਰਮਾਣ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ, ਜਾਂਚ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮ ਫੇਜ਼ ਵਿੱਚ ਟਾਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ ਚਲਦੀ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਕੱਟ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਹਰ ਵਾਰ ਜਦੋਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਇੱਕ ਜਾਂਚ ਨੂੰ ਕੱਟ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਦੇ ਨਾਲ।ਕਿਉਂਕਿ ਰੀਲੀਜ਼ ਫਲੋਰੋਫੋਰਸ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ-ਨਾਲ-ਇੱਕ ਸਬੰਧ ਹੈ, ਇਸ ਤਕਨੀਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਯੰਤਰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ PE ਕੰਪਨੀ ਦੁਆਰਾ ਵਿਕਸਤ ABI7100 PCR ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਵੀ ਵਰਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਜੇਕਰ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ABI7700 ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਿਸਮ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪੂਰੀ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਨਤੀਜੇ ਕੰਪਿਊਟਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਸਿੱਧੇ ਦਿੱਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਜੇਕਰ ਤੁਸੀਂ ਹੋਰ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਤੁਹਾਨੂੰ RQ+, RQ-, △RQ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਸੇ ਸਮੇਂ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਡਿਟੈਕਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।RQ+ ਨਮੂਨਾ ਟਿਊਬ ਦੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਐਮੀਸ਼ਨ ਗਰੁੱਪ ਦੀ ਲੂਮਿਨਿਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਬੁਝਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਮੂਹ ਦੀ ਲੂਮਿਨਿਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, RQ- ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਦੋ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, △RQ (△RQ=RQ+-RQ-) ਪੀਸੀਆਰ ਫਲੂ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਸੰਕੇਤ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਸਤੁਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਪੀਸੀਆਰ ਫਲੂ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਬਾਅਦ ਸੰਕੇਤ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ। .ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਪੜਤਾਲਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਪੜਤਾਲ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਪੂਰੀਆਂ ਕਰਨੀਆਂ ਚਾਹੀਦੀਆਂ ਹਨ: ① ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਲਗਭਗ 20-40 ਬੇਸਾਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।② ਸਿੰਗਲ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਡੁਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ GC ਬੇਸਾਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ 40% ਅਤੇ 60% ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੈ।③ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚੋ ਜਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਓਵਰਲੈਪ ਕਰੋ।④ ਪੜਤਾਲ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿਚਕਾਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿਚਕਾਰ ਬਾਈਡਿੰਗ ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪੜਤਾਲ ਦਾ Tm ਮੁੱਲ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਤੋਂ ਘੱਟ 5°C ਵੱਧ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪੜਤਾਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ, ਪੜਤਾਲ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਕ੍ਰਮ ਵਿਚਕਾਰ ਸਮਰੂਪਤਾ, ਅਤੇ ਪੜਤਾਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਚਕਾਰ ਦੂਰੀ ਸਭ ਦਾ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ।

ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦ:

ਚੀਨ Lnc-RT Heroᵀᴹ I(gDNase ਦੇ ਨਾਲ)(lncRNA ਤੋਂ ਪਹਿਲੀ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਸੁਪਰ ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ) ਨਿਰਮਾਤਾ ਅਤੇ ਸਪਲਾਇਰ |ਫੋਰਜੀਨ (foreivd.com)

ਚੀਨ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ Easyᵀᴹ-Taqman ਨਿਰਮਾਤਾ ਅਤੇ ਸਪਲਾਇਰ |ਫੋਰਜੀਨ (foreivd.com)