ਕੋਈ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਿਗਨਲ ਨਹੀਂ

1. ਕਿੱਟ ਵਿਚਲਾ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਲਤ ਸਟੋਰੇਜ ਜਾਂ ਕਿੱਟ ਦੀ ਮਿਆਦ ਪੁੱਗਣ ਕਾਰਨ ਆਪਣੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਗੁਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਕਿੱਟ ਦੀਆਂ ਸਟੋਰੇਜ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ;ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਇੱਕ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜੋ ਜਾਂ ਸੰਬੰਧਿਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਕਿੱਟ ਖਰੀਦੋ।

2. ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹਨ।
ਸੁਝਾਅ: ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ ਜਾਂ ਵਰਤੇ ਗਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ।

3. Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਢੁਕਵਾਂ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਸਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ 2× ਰੀਅਲ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ ਦੀ Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 3.5mM ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕੁਝ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵੱਧ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਤੁਸੀਂ Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸਿੱਧੇ MgCl2 ਨੂੰ ਜੋੜ ਸਕਦੇ ਹੋ।ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਲਈ ਹਰ ਵਾਰ Mg2+ 0.5mm ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

4. ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਨੁਕੂਲ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਜਾਂ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗਲਤ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਿਗਨਲ ਚੰਗਾ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਐਡਜਸਟ ਕਰੋ।

5. ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਟੈਂਪਲੇਟ ਲੀਨੀਅਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਡਾਇਲਿਊਸ਼ਨ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੇ ਨਾਲ ਟੈਂਪਲੇਟ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰੋ।

NTC ਦਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਮੁੱਲ ਹੈ

1. ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਰੀਏਜੈਂਟ ਗੰਦਗੀ.
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਨਵੇਂ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।

2.ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਗੰਦਗੀ ਆਈ.
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਜ਼ਰੂਰੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਉਪਾਅ ਕਰੋ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ: ਲੈਟੇਕਸ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨਣੇ, ਫਿਲਟਰ ਨਾਲ ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ, ਆਦਿ।

3.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡੀਗਰੇਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ।
ਸੁਝਾਅ: ਇਹ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ SDS-PAGE ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਖਰਾਬ ਹੋ ਗਏ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਨਵੇਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।

ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਇਮਰ ਜਾਂ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ

1. Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਢੁਕਵਾਂ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਸਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ 2× ਰੀਅਲ ਪੀਸੀਆਰ ਈਜ਼ੀਟੀਐਮ ਮਿਕਸ ਦੀ Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 3.5 mM ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕੁਝ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਲਈ, Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵੱਧ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਤੁਸੀਂ Mg2+ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸਿੱਧੇ MgCl2 ਨੂੰ ਜੋੜ ਸਕਦੇ ਹੋ।ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਲਈ ਹਰ ਵਾਰ Mg2+ 0.5mm ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

2. ਪੀਸੀਆਰ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਪੀਸੀਆਰ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਹਰ ਵਾਰ 1℃ ਜਾਂ 2℃ ਵਧਾਓ।

3. ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਬਹੁਤ ਲੰਮਾ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ 100-150bp ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ, 500bp ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ।

4.ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡੀਗਰੇਡ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਖਾਸ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਦਿੱਖ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰਨਗੇ।
ਸੁਝਾਅ: ਇਹ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ SDS-PAGE ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਖਰਾਬ ਹੋ ਗਏ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਨਵੇਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।

5. ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਗਲਤ ਹੈ, ਜਾਂ ਸਿਸਟਮ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਬਹੁਤ ਛੋਟੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਕਾਰਨ ਖੋਜ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਘੱਟ ਜਾਵੇਗੀ।ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਚਲਾਉਣ ਲਈ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਸਾਧਨ ਦੁਆਰਾ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।

ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਮਾੜੀ ਦੁਹਰਾਉਣਯੋਗਤਾ

1. ਯੰਤਰ ਖਰਾਬ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਯੰਤਰ ਦੇ ਹਰੇਕ PCR ਮੋਰੀ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਗਲਤੀਆਂ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਜਿਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਜਾਂ ਖੋਜ ਦੌਰਾਨ ਮਾੜੀ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸਾਧਨ ਦੇ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਜਾਂਚ ਕਰੋ।

2. ਨਮੂਨਾ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਚੰਗੀ ਨਹੀਂ ਹੈ.
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਅਸ਼ੁੱਧ ਨਮੂਨੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਮਾੜੀ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰਨਗੇ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਟੈਂਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ SDS-PAGE ਦੁਆਰਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

3.PCR ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਅਤੇ ਸਟੋਰੇਜ ਦਾ ਸਮਾਂ ਬਹੁਤ ਲੰਬਾ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਤਿਆਰੀ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਇਸ ਨੂੰ ਜ਼ਿਆਦਾ ਦੇਰ ਤੱਕ ਨਾ ਛੱਡੋ।

4. ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਨੁਕੂਲ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਜਾਂ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗਲਤ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਸਿਗਨਲ ਚੰਗਾ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਉਚਿਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਐਡਜਸਟ ਕਰੋ।

5. ਪੀਸੀਆਰ ਸਿਸਟਮ ਗਲਤ ਹੈ, ਜਾਂ ਸਿਸਟਮ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੈ।
ਸੁਝਾਅ: ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਬਹੁਤ ਛੋਟੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਕਾਰਨ ਖੋਜ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਘੱਟ ਜਾਵੇਗੀ।ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਚਲਾਉਣ ਲਈ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਸਾਧਨ ਦੁਆਰਾ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।