ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਕੁੱਲ RNA ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਿੱਟਾਂ
ਕਿੱਟ ਦਾ ਵੇਰਵਾ:
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਉੱਚ-ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਕੁੱਲ ਆਰ.ਐਨ.ਏ.
RNA ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਬਾਰੇ ਚਿੰਤਾ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ।ਸਾਰਾ ਸਿਸਟਮ RNase-ਮੁਕਤ ਹੈ
DNA-ਸਫ਼ਾਈ ਕਾਲਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ DNA ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਹਟਾਓ
DNase ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹਟਾਓ
ਸਧਾਰਨ — ਸਾਰੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਪੂਰੇ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ
ਤੇਜ਼-ਓਪਰੇਸ਼ਨ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ
ਸੁਰੱਖਿਅਤ—ਕੋਈ ਜੈਵਿਕ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨਹੀਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ
ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ—OD260/280≈1.8-2.1
ਕਿੱਟਾਂ ਦੇ ਵੇਰਵੇ
50 ਤਿਆਰੀ, 200 ਤਿਆਰੀ
ਇਹ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈਸਪਿਨ ਕਾਲਮ ਅਤੇ ਫਾਰਮੂਲਾਸਾਡੀ ਕੰਪਨੀ ਦੁਆਰਾ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਉੱਚ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਉੱਚ-ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਉੱਚ-ਗੁਣਵੱਤਾ ਵਾਲੇ ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ ਕੱਢ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਇੱਕ ਕੁਸ਼ਲ DNA-ਸਫਾਈ ਕਾਲਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਲਾਈਸੇਟ ਤੋਂ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੋਖ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸਧਾਰਨ ਅਤੇ ਸਮਾਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ;ਆਰਐਨਏ-ਸਿਰਫ਼ ਕਾਲਮ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨਾਲ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਸਾਰਾ ਸਿਸਟਮ RNase-ਮੁਕਤ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ RNA ਡਿਗਰੇਡ ਨਾ ਹੋਵੇ;ਬਫਰ RW1, Buffer RW2 ਬਫਰ ਵਾਸ਼ਿੰਗ ਸਿਸਟਮ, ਤਾਂ ਜੋ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ RNA ਪ੍ਰੋਟੀਨ, DNA, ਆਇਨ, ਅਤੇ ਜੈਵਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਹੋਵੇ।
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
| ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ | ||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ | ਆਰ.ਈ.-03011 | ਆਰ.ਈ.-03014 |
| 50 ਟੀ | 200 ਟੀ | |
| ਬਫਰ RL1* | 25 ਮਿ.ਲੀ | 100 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ RL2 | 15 ਮਿ.ਲੀ | 60 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ RW1* | 25 ਮਿ.ਲੀ | 100 ਮਿ.ਲੀ |
| ਬਫਰ RW2 | 24 ਮਿ.ਲੀ | 96 ਮਿ.ਲੀ |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 10 ਮਿ.ਲੀ | 40 ਮਿ.ਲੀ |
| RNA-ਸਿਰਫ਼ ਕਾਲਮ | 50 | 200 |
| ਡੀਐਨਏ-ਸਫ਼ਾਈ ਕਾਲਮ | 50 | 200 |
| ਹਦਾਇਤ ਮੈਨੂਅਲ | 1 ਟੁਕੜਾ | 1 ਟੁਕੜਾ |
ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਜਾਣਕਾਰੀ
| ਫਾਰਮੈਟ | ਸਪਿਨ ਕਾਲਮ | ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਭਾਗ | ਫੋਰਜੀਨ ਕਾਲਮ, ਰੀਐਜੈਂਟ |
| ਪ੍ਰਵਾਹ | 1-24 ਨਮੂਨੇ | ਪ੍ਰਤੀ ਤਿਆਰੀ ਸਮਾਂ | ~30 ਮਿੰਟ (24 ਨਮੂਨੇ) |
| ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ | ਡੈਸਕ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ | ਪਾਈਰੋਲਿਸਿਸ ਵੱਖ ਕਰਨਾ | ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਵਿਭਾਜਨ |
| ਨਮੂਨਾ | ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ;ਸੈੱਲ | ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ | ਟਿਸ਼ੂ: 10-20 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ;ਸੈੱਲ:(1-5)×106 |
| ਇਲੂਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ | 50-200 μL | ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲੋਡਿੰਗ ਵਾਲੀਅਮ | 850 μL |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਫਾਇਦੇ
■ ਆਰਐਨਏ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਬਾਰੇ ਚਿੰਤਾ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ;ਸਾਰਾ ਸਿਸਟਮ RNase-ਮੁਕਤ ਹੈ
■ DNA-ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ DNA-ਸਫਾਈ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਹਟਾਓ
■ DNase ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹਟਾਓ
■ ਸਧਾਰਨ-ਸਾਰੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਪੂਰੇ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ
■ ਤੇਜ਼-ਓਪਰੇਸ਼ਨ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪੂਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ
■ ਸੁਰੱਖਿਅਤ-ਕੋਈ ਜੈਵਿਕ ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ
■ ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ -OD260/280≈1.8-2.1
ਕਿੱਟ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਾਜ਼ੇ ਜਾਂ ਜੰਮੇ ਹੋਏ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਜਾਂ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ।
ਉਤਪਾਦ ਪੈਰਾਮੀਟਰ
■ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ: ਫਸਟ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ, RT-PCR, ਅਣੂ ਕਲੋਨਿੰਗ, ਉੱਤਰੀ ਬਲੌਟ, ਆਦਿ।
■ ਨਮੂਨੇ: ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ, ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ
■ ਖੁਰਾਕ: ਟਿਸ਼ੂ 10-20mg, ਸੈੱਲ(2-5)×106
■ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦੀ ਅਧਿਕਤਮ ਡੀਐਨਏ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ: 80 μg
■ ਇਲੂਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ: 50-200 μl
ਚਿੱਤਰ
ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਨਾਲ 20mg ਦਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ
ਮਾਊਸ ਦੇ ਤਾਜ਼ਾ ਨਮੂਨੇ, 5% ਸ਼ੁੱਧ ਕੁੱਲ RNA 1% ਐਗਰ ਲਓ
ਗਲਾਈਕੋਜੇਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ
1: ਸਪਲੀਨ 2: ਗੁਰਦਾ
3: ਜਿਗਰ 4: ਦਿਲ
ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ
ਕਿੱਟ ਨੂੰ 24 ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (15–25 ℃) ਜਾਂ 2–8 ℃ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਬਫਰ RL1 ਨੂੰ β- mercaptoethanol (ਵਿਕਲਪਿਕ) ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 1 ਮਹੀਨੇ ਲਈ 4 ℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਹਵਾਲੇ ਦਿੱਤੇ ਲੇਖ
1.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.ਸੈਂਟਰਲ ਕੰਪੋਜ਼ਿਟ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲਨ ਦੁਆਰਾ ਲਿਵਰ ਬੇਸ ਸੰਪਾਦਨ ਲਈ mRNA-ਲੋਡਡ ਲਿਪਿਡ-ਵਰਗੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ।ਐਡਵੋਕੇਟਫੰਕਟ।ਮੈਟਰ।2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.ਉਪਚਾਰਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਸਵੈ-ਚਾਲਤ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਫਾਸਫੈਟਿਡਿਲਸਰੀਨ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਦੁਆਰਾ ਇਮਯੂਨੋਮੋਡੂਲੇਟਰੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਸਿਗਨਲ ਟਰਾਂਸਡਕਟ ਟਾਰਗੇਟ ਥਰ।2021 ਜੁਲਾਈ 14;6(1):270।doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA ਸੋਧ ਆਨਕੋਜੈਨਿਕ mRNA ਅਨੁਵਾਦ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇੰਟਰਾਹੇਪੇਟਿਕ ਕੋਲੈਂਜੀਓਕਾਰਸੀਨੋਮਾ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਮੋਲ ਸੈੱਲ.29 ਜੁਲਾਈ 2021:S1097-2765(21)00555-4।doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Mediated m6A ਸੋਧ ਐਂਡੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਰੈਟੀਕੁਲਮ ਹੋਮਿਓਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖ ਕੇ ਜਿਗਰ ਦੇ ਪੁਨਰਜਨਮ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਸੈੱਲ ਮੋਲ ਗੈਸਟ੍ਰੋਐਂਟਰੋਲ ਹੈਪੇਟੋਲ.2021;12(2):633-651।doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
ਲਈ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲਸ਼ਨ ਕਿੱਟਾਂ ਹੋਰ ਨਮੂਨਾ ਸਰੋਤਉਪਲਬਧ ਹਨ:
ਸੈੱਲ, ਪੌਦਾ, ਵਾਇਰਲ, ਖੂਨ, ਆਦਿ.
RNA ਕੱਢਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦਾ ਜਾਂ RNA ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ
ਅਕਸਰ ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਕਾਰਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ: ਟਿਸ਼ੂ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਆਰਐਨਏ ਸਮੱਗਰੀ, ਸੰਚਾਲਨ ਦੀ ਵਿਧੀ, ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ, ਆਦਿ।
1. ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਆਈਸ ਬਾਥ ਜਾਂ ਕ੍ਰਾਇਓਜੇਨਿਕ (4 °C) ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਪੂਰੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੌਰਾਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (15-25 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ) 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰੋ, ਬਰਫ਼ ਦਾ ਇਸ਼ਨਾਨ ਨਾ ਕਰੋ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਨਾ ਕਰੋ।
2. ਗਲਤ ਨਮੂਨਾ ਸੰਭਾਲ ਜਾਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਮੂਨਾ ਸਟੋਰੇਜ ਸਮਾਂ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ -80 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ ਜਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਵਿੱਚ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਚੋ;RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਜਾਂ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ।
3. ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਨਮੂਨਾ lysis.
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸਮਰੂਪਤਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਇਹ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰੋ ਕਿ ਟਿਸ਼ੂ ਕਾਫ਼ੀ ਸਮਰੂਪ ਹੈ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕਰਨ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲ ਕਾਫ਼ੀ ਵੰਡੇ ਹੋਏ ਹਨ।
4. ਐਲੂਐਂਟ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਸਿਫਾਰਸ਼: ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਕਿ RNase-ਮੁਕਤ ddH2O ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਮੱਧ ਵਿੱਚ ਡ੍ਰੌਪਵਾਈਜ਼ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
5. ਪੂਰਨ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਬਫਰ RL2 ਜਾਂ ਬਫਰ RW2 ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਜੋੜੀ ਗਈ ਸੀ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਹਿਦਾਇਤਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ, ਬਫ਼ਰ RL2 ਅਤੇ ਬਫ਼ਰ RW2 ਵਿੱਚ ਪੂਰਨ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
6. ਟਿਸ਼ੂ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਖੁਰਾਕ ਉਚਿਤ ਨਹੀਂ ਹੈ।
ਸਿਫਾਰਸ਼: ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ 10-20 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਜਾਂ (1-5) × 10 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ6ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਤੀ 500 μl ਬਫਰ RL1, ਕਿਉਂਕਿ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ RNA ਕੱਢਣ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆ ਸਕਦੀ ਹੈ।
7. ਗਲਤ ਇਲੂਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ ਜਾਂ ਅਧੂਰਾ ਇਲੂਸ਼ਨ।
ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼: ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦਾ ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ 50-200 μl ਹੈ;ਜੇਕਰ ਇਲੂਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰੀਹੀਟਿਡ RNase-ਫ੍ਰੀ ddH ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਪਲੇਸਮੈਂਟ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।2O, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ 5-10 ਮਿੰਟ ਲਈ।
8. ਬਫਰ RW2 ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਈਥਾਨੋਲ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਜੇਕਰ ਬਫ਼ਰ RW2 ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੈ, 1 ਮਿੰਟ ਲਈ ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ, ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਕਾਰਵਾਈ ਲਈ ਸਮਾਂ 2 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਲੋੜੀਂਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਨੂੰ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।
ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ ਘਟੀਆ ਹੈ
ਸ਼ੁੱਧ RNA ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਸੰਭਾਲ, RNase ਗੰਦਗੀ, ਅਤੇ ਹੇਰਾਫੇਰੀ, ਆਦਿ ਵਰਗੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।
1. ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਸਮੇਂ ਸਿਰ ਨਹੀਂ ਰੱਖੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਜੇਕਰ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਜਾਂ ਸੈੱਲ ਇਕੱਠੇ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਮੇਂ ਸਿਰ ਨਹੀਂ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਤੁਰੰਤ -80 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਜਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ 'ਤੇ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੀਜ਼ਰਵ ਕਰੋ।ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਲਈ, ਜਦੋਂ ਵੀ ਸੰਭਵ ਹੋਵੇ, ਨਵੇਂ ਲਏ ਗਏ ਟਿਸ਼ੂ ਜਾਂ ਸੈੱਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
2. ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪਿਘਲਾਉਣਾ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸਟੋਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਣ ਲਈ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਣਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ-ਪਿਘਲਣ ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਵਿਗੜਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
3. ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ RNase ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜਾਂ ਡਿਸਪੋਜ਼ੇਬਲ ਦਸਤਾਨੇ, ਮਾਸਕ ਆਦਿ ਨਹੀਂ ਪਹਿਨੇ ਗਏ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵੱਖਰੇ ਆਰਐਨਏ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਕਮਰਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਾਰਣੀ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
RNase ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੇ RNA ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੌਰਾਨ ਡਿਸਪੋਸੇਬਲ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਮਾਸਕ ਪਹਿਨੋ।
4. ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਰਤੋਂ ਦੌਰਾਨ RNase ਨਾਲ ਦੂਸ਼ਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਸਿਫਾਰਸ਼: ਸੰਬੰਧਿਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਐਨੀਮਲ ਟੋਟਲ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।
5. RNA ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਟਿਪਸ ਆਦਿ RNase ਨਾਲ ਦੂਸ਼ਿਤ ਹਨ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਕਿ ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਟਿਪਸ, ਪਾਈਪੇਟਸ, ਆਦਿ ਸਾਰੀਆਂ ਆਰਨੇਜ਼-ਮੁਕਤ ਹਨ।
ਸ਼ੁੱਧ ਪ੍ਰਾਪਤ ਆਰਐਨਏ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ
ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਆਰਐਨਏ, ਜੇਕਰ ਲੂਣ ਆਇਨਾਂ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਸਮਗਰੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰੇਗੀ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ: ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਨਾਰਦਰਨ ਬਲੌਟ ਐਟ ਅਲ।
1. ਅਲੋਪ ਕੀਤੇ ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਲੂਣ ਆਇਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਕਿ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਬਫ਼ਰ RW2 ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਅਤੇ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਲਈ ਦਰਸਾਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਸਪੀਡ 'ਤੇ 2 ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਵਾਸ਼ ਕਰੋ;ਜੇਕਰ ਕੋਈ ਲੂਣ ਆਇਨ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੈ, ਤਾਂ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਬਫਰ RW2 'ਤੇ ਛੱਡ ਦਿਓ ਅਤੇ ਲੂਣ ਦੀ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਕਰੋ।
2. ਐਲੀਊਡਡ ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ।
ਸਿਫਾਰਿਸ਼: ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰੋ ਕਿ ਬਫਰ RW2 ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਲਈ ਦਰਸਾਏ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਗਤੀ 'ਤੇ ਕਰੋ, ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ 2 ਮਿੰਟ ਤੱਕ ਵਧਾਓ ਜੇਕਰ ਅਜੇ ਵੀ ਈਥਾਨੋਲ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੈ, ਜਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਛੱਡ ਦਿਓ। ਆਈਡਿਊ
