ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT qPCR ਕਿੱਟ—SYBR GREEN I ਡਾਇਰੈਕਟ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਸੈੱਲ ਤਿਆਰ ਇਕ-ਪੜਾਅ ਦੀ qRT-PCR ਕਿੱਟਾਂ
ਵਰਣਨ
ਇਹ ਕਿੱਟ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ ਜੋ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਜਾਰੀ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਮਾਂ ਬਰਬਾਦ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਅਤੇ ਮਿਹਨਤੀ ਆਰਐਨਏ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਿਰਫ 7 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।5×ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ ਅਤੇ 2×ਕਿੱਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਰੀਏਜੈਂਟ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਸਲ-ਸਮੇਂ ਦੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
5×ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ ਅਤੇ 2×ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਵਿੱਚ ਮਜ਼ਬੂਤ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ RT-qPCR ਲਈ ਟੈਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ ਵਿਲੱਖਣ ਆਰਐਨਏ ਹਾਈ-ਐਫੀਨਿਟੀ ਫੋਰਜੀਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ, ਅਤੇ ਹੌਟ ਡੀ-ਟੈਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਡੀਐਨਟੀਪੀਜ਼, ਐਮਜੀਸੀਐਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।2, ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਬਫਰ, ਪੀਸੀਆਰ ਆਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
| ਭਾਗ I | ਬਫਰ CL |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | |
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | |
| ਭਾਗ II | ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ |
| 5× ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ | |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR | |
| 50× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | |
| ਹਦਾਇਤਾਂ | |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਫਾਇਦੇ
■ਸਰਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ: ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾਲ, ਆਰਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਸਿਰਫ਼ 7 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
■ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮੰਗ ਛੋਟੀ ਹੈ, ਜਿੰਨਾ ਘੱਟ 10 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
■ ਉੱਚ ਥ੍ਰੋਪੁੱਟ: ਇਹ 384, 96, 24, 12, 6-ਵੱਲ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
■ ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
■ ਅਨੁਕੂਲਿਤ RT ਅਤੇ qPCR ਸਿਸਟਮ ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-PCR ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਕੁਸ਼ਲ ਅਤੇ PCR ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਖਾਸ, ਅਤੇ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਕਿੱਟ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਕੋਪ: ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ.
- ਸੈਂਪਲ ਲਾਈਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ RNA: ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੇ ਸਿਰਫ RT-qPCR ਟੈਂਪਲੇਟ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
- ਕਿੱਟ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, siRNA-ਵਿਚੋਲੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ, ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ, ਆਦਿ।
ਚਿੱਤਰ
ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ
ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੇ ਭਾਗ I ਨੂੰ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ;ਭਾਗ II -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II ਨੂੰ 4 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ℃, -20 ℃ 'ਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਨਾ ਕਰੋ.
ਰੀਐਜੈਂਟ 2×ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਨੂੰ -20 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ℃ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ;ਜੇਕਰ ਅਕਸਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ 4 'ਤੇ ਵੀ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ ਲਈ ℃ (10 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਵਰਤੋਂ)।
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਸਿਧਾਂਤ
ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ:
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ: 18-30bp.
GC ਸਮੱਗਰੀ: 40-60%.
Tm ਮੁੱਲ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਸੌਫਟਵੇਅਰ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 5, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦਾ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਅੱਪਸਟਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।Tm ਗਣਨਾ ਫਾਰਮੂਲਾ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T)।ਪੀਸੀਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, 5 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਟੀਐਮ ਮੁੱਲ ਤੋਂ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਜੋਂ ਚੁਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਅਨੁਸਾਰੀ ਵਾਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ)।
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ:
ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ 100-150bp ਹੈ।
ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਅੱਪਸਟਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ 3′ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ 2 ਜਾਂ ਵਧੇਰੇ ਪੂਰਕ ਅਧਾਰਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਤੋਂ ਬਚੋ।
ਪ੍ਰਾਈਮਰ 3′ ਟਰਮੀਨਲ ਬੇਸ 3 ਵਾਧੂ ਲਗਾਤਾਰ G ਜਾਂ C ਦੇ ਨਾਲ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਿੱਚ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਪੂਰਕ ਬਣਤਰ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਦਾ ਗਠਨ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇਗਾ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ।
ATCG ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਬਰਾਬਰ ਵੰਡਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ 3′ ਟਰਮੀਨਲ ਬੇਸ ਨੂੰ T ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਅੰਤਿਕਾ 1: ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਸਪਲੀਮੈਂਟ ਪੈਕ
1.ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਹੱਲ
|
| |||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (24-ਵੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਸਿਸਟਮ / ਖੂਹ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ਟੀ | 500 ਟੀ | ||
| ਭਾਗਆਈ | ਬਫਰ CL | 20 ਮਿ.ਲੀ | 100 ਮਿ.ਲੀ |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | 400 μl | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | |
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | 10 ਮਿ.ਲੀ | |
| ਭਾਗII | ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ | 400 μl | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 |
2.RT ਮਿਕਸ
|
| |
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (20 μl ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ਟੀ | |
| 5× ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ | 800 μl |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 1.7 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 |
|
| ||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (20 μl ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ਟੀ | 1000 ਟੀ | |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | 1.7 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 6 |
| 50× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 1.7 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ |
ਨਿਰਦੇਸ਼ ਮੈਨੂਅਲ:
