1. RNA ਘੋਲ ਦੇ ਸੋਖਣ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਓ

280, 320, 230, ਅਤੇ 260 nm 'ਤੇ ਸਮਾਈ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ, ਬੈਕਗ੍ਰਾਉਂਡ (ਘੋਲ ਦੀ ਗੰਦਗੀ), ਲੂਣ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਰਗੇ ਜੈਵਿਕ ਪਦਾਰਥ ਦੇ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਿਰਫ਼ OD260/OD280 (ਅਨੁਪਾਤ, ਆਰ) 'ਤੇ ਨਜ਼ਰ ਮਾਰੋ।ਜਦੋਂ 1.8~2.0, ਅਸੀਂ ਸੋਚਦੇ ਹਾਂ ਕਿ RNA ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਾਂ ਹੋਰ ਜੈਵਿਕ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਬਰਦਾਸ਼ਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਜਦੋਂ ਟ੍ਰਿਸ ਨੂੰ ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਬਫਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ R ਮੁੱਲ 2 ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਹ <2.2 ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ)।ਜਦੋਂ R<1.8, ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਾਂ ਹੋਰ ਜੈਵਿਕ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦਾ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਵਧੇਰੇ ਸਪੱਸ਼ਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਕਿਸਮਤ ਲੋੜਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਜਦੋਂ R>2.2, ਇਸਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ RNA ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।
 
2. RNA ਦਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਟਿਕ ਪੈਟਰਨ
ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਆਰਐਨਏ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਡੀਨੇਚਰਿੰਗ ਜੈੱਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਪਰ ਜੇ ਇਹ ਸਿਰਫ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਹੈ, ਤਾਂ ਡੀਨੈਚਰਿੰਗ ਜੈੱਲ ਜ਼ਰੂਰੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਮ ਐਗਰੋਸ ਜੈੱਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ 28S ਅਤੇ 18S ਬੈਂਡਾਂ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ, ਜਾਂ mRNA ਸਮੀਅਰ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਜੇਕਰ 28S ਅਤੇ 18S ਬੈਂਡ ਚਮਕਦਾਰ, ਸਪਸ਼ਟ ਅਤੇ ਤਿੱਖੇ ਹਨ (ਬੈਂਡਾਂ ਦੇ ਕਿਨਾਰਿਆਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦਿੰਦੇ ਹੋਏ ਸਪੱਸ਼ਟ ਹਨ), ਅਤੇ 28S ਦੀ ਚਮਕ 18S ਬੈਂਡ ਨਾਲੋਂ ਦੁੱਗਣੀ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ, ਤਾਂ ਅਸੀਂ RNA ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨੂੰ ਵਧੀਆ ਮੰਨਦੇ ਹਾਂ।
ਉਪਰੋਕਤ ਦੋ ਵਿਧੀਆਂ ਹਨ ਜੋ ਅਸੀਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਦੇ ਹਾਂ, ਪਰ ਇਹਨਾਂ ਦੋਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਕੋਈ ਵੀ ਵਿਧੀ ਸਾਨੂੰ ਸਪਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਹੀਂ ਦੱਸ ਸਕਦੀ ਕਿ ਕੀ RNA ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਬਚਿਆ RNase ਹੈ।ਜੇਕਰ ਘੋਲ ਵਿੱਚ RNase ਦੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਮਾਤਰਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਉਪਰੋਕਤ ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਇਸਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਸਾਡੇ ਲਈ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ, ਪਰ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ 37 ਡਿਗਰੀ ਤੋਂ ਉੱਪਰ ਅਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਕੀਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਜੇਕਰ ਆਰਐਨਏ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਆਰਨੇਜ਼ ਦੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਮਾਤਰਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਆਪਣੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਢੁਕਵਾਂ ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਤੇ ਸਮਾਂ ਹੋਵੇਗਾ, ਅਤੇ ਬੇਸ਼ੱਕ ਇਸ ਸਮੇਂ ਪ੍ਰਯੋਗ ਠੰਡਾ ਹੋਵੇਗਾ।ਹੇਠਾਂ ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਵਿਧੀ ਪੇਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜੋ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੀ RNA ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਬਚਿਆ RNase ਹੈ।
 
3. ਹੀਟ ਪ੍ਰੀਜ਼ਰਵੇਸ਼ਨ ਟੈਸਟ
ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, RNA ਘੋਲ ਤੋਂ ਦੋ 1000 ng RNA ਖਿੱਚੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਜੋੜੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ pH 7.0 ਟ੍ਰਿਸ ਬਫਰ ਨਾਲ 10 ul ਦੀ ਕੁੱਲ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਪੂਰਕ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਟਿਊਬ ਦੀ ਕੈਪ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰੋ।ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਨੂੰ 70 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਗਰਮ ਰੱਖੋ।ਦੂਜੇ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ -20 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਜਦੋਂ ਸਮਾਂ ਪੂਰਾ ਹੋ ਜਾਵੇ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਲਈ ਦੋ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿਓ।ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਪੂਰਾ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਦੋਵਾਂ ਦੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਟਿਕ ਬੈਂਡਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰੋ।ਜੇਕਰ ਦੋਵਾਂ ਦੇ ਬੈਂਡ ਇਕਸਾਰ ਹਨ ਜਾਂ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਹੈ (ਬੇਸ਼ੱਕ, ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਬੈਂਡ ਵੀ ਵਿਧੀ 2 ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਦੇ ਹਨ), ਤਾਂ ਇਸਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ RNA ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਚਿਆ ਹੋਇਆ RNase ਗੰਦਗੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਅਤੇ RNA ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਬਹੁਤ ਵਧੀਆ ਹੈ।ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਜੇਕਰ 70 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਨਮੂਨਾ ਸਪੱਸ਼ਟ ਗਿਰਾਵਟ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ RNA ਘੋਲ ਵਿੱਚ RNase ਗੰਦਗੀ ਹੈ।
 
2 RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਢੰਗ ਅਤੇ ਤਕਨੀਕਾਂ
RNA ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਵੇਲੇ ਸਾਨੂੰ ਅਕਸਰ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਦਾ ਸਾਹਮਣਾ ਕਰਨਾ ਪੈਂਦਾ ਹੈ: (1) RNA ਉਪਜ ਘੱਟ ਹੈ;(2) ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਗੰਭੀਰ ਲੂਣ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਹੈ;(3) ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਗੰਭੀਰ ਜੈਵਿਕ ਘੋਲਨ ਵਾਲਾ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਹੈ;(4) ਨਮੂਨਾ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ
 
1. ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਕੁੱਲ RNA ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ
guanidine isothiocyanate ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਵਿਧੀ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਕੁੱਲ RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਵਿਧੀਆਂ ਹਨ।ਇਹ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਛੋਟੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਖਰਗੋਸ਼ ਦੀ ਚਮੜੀ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਜੋੜਨ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂ ਤੋਂ ਕੁੱਲ RNA ਕੱਢਣਾ;ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ, ਇੱਕ ਆਮ-ਉਦੇਸ਼ ਲਾਈਸਿਸ ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਜੋਂ, ਪੌਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਫੰਜਾਈ ਅਤੇ ਹੋਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪੌਲੀਸੈਕਰਾਈਡਸ ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕੈਮਿਲੀਆ ਓਲੀਫੇਰਾ, ਚਾਹ ਪੱਤੀਆਂ, ਰੇਪਸੀਡ, ਆਦਿ, ਕੁੱਲ RNA ਕੱਢਣ ਲਈ CTAB ਵਿਧੀ ਵੀ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।

ਇੱਕ ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਵਿਧੀ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਡਬਲ-ਕਾਲਮ ਵਿਧੀ ਇਸ ਦੇ ਆਮ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਸੰਚਾਲਨ, RNase ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਕੋਈ ਲੋੜ ਨਹੀਂ, ਅਤੇ ਸੁਰੱਖਿਆ - ਕੱਢਣ ਲਈ ਕੋਈ ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ, ਫਿਨੋਲ ਅਤੇ ਹੋਰ ਜੈਵਿਕ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੇ ਕਾਰਨ ਬਹੁਤ ਮਸ਼ਹੂਰ ਹੈ।(ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੇ ਉਤਪਾਦ )