ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ ਅਤੇ EP ਟਿਊਬਾਂ ਦੀ ਨਸਬੰਦੀ, ਆਦਿ।

1. ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦੇ ਨਾਲ 0.1% (ਇੱਕ ਹਜ਼ਾਰਵਾਂ) DEPC (ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਜ਼ਹਿਰੀਲਾ ਪਦਾਰਥ) ਤਿਆਰ ਕਰੋ, ਇਸਨੂੰ ਫਿਊਮ ਹੁੱਡ ਵਿੱਚ ਸਾਵਧਾਨੀ ਨਾਲ ਵਰਤੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਦੂਰ 4°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ;

DEPC ਪਾਣੀ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ ਹੈ ਜੋ DEPC ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਉੱਚ ਦਬਾਅ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਜੀਵ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।RNase, DNase ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਹੋਣ ਲਈ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।

2. ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਅਤੇ EP ਟਿਊਬ ਨੂੰ 0.1% DEPC ਵਿੱਚ ਪਾਓ, ਅਤੇ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਅਤੇ EP ਟਿਊਬ 0.1% DEP ਨਾਲ ਭਰੇ ਹੋਏ ਹਨ।

3. ਰੋਸ਼ਨੀ ਤੋਂ ਬਚਾਓ, ਰਾਤ ​​ਭਰ ਖੜੇ ਰਹਿਣ ਦਿਓ (12-24 ਘੰਟੇ)

4. ਟਿਪ ਅਤੇ EP ਟਿਊਬ ਵਾਲੇ ਬਕਸੇ ਨੂੰ DEPC ਵਿੱਚ ਭਿੱਜਣ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।ਟਿਪ ਜਾਂ EP ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ DEPC ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਮੋਟੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਸਨੂੰ ਪੈਕ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਲਪੇਟੋ।

5. 121 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ, 30 ਮਿੰਟ

6. 180 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ, ਕਈ ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੁੱਕਾ (ਘੱਟੋ ਘੱਟ 3 ਘੰਟੇ)

ਨੋਟ: ਏ.DEPC ਨੂੰ ਸੰਭਾਲਣ ਵੇਲੇ ਲੈਟੇਕਸ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਮਾਸਕ ਪਹਿਨੋ!b, ਜਾਂ DEPC ਨਸਬੰਦੀ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ, 130 ℃, 90 ਮਿੰਟ ਆਟੋਕਲੇਵ (ਕਈ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਦੋ ਵਾਰ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਨਸਬੰਦੀ)

ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਦੇ ਵਿਚਾਰ

ਟਿਸ਼ੂ RNA ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਅਸਫਲਤਾ ਦੇ ਦੋ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਵਰਤਾਰੇ

ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਗਿਰਾਵਟ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ,ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਦੇ ਸੰਬੰਧ ਵਿੱਚ, ਆਓ ਪਹਿਲਾਂ ਦੇਖੀਏ ਕਿ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਆਰਐਨਏ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਕਿਉਂ ਨਹੀਂ ਡਿਗਰੇਡ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਮੌਜੂਦਾ RNA ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ਹਿੱਸੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ RNase ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਰੋਕਦੇ ਹਨ।ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਈਸੇਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਬਸ ਮਿਲਾਓ, ਸਾਰੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਸੇਟ ਨਾਲ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਲਾਈਸੇਟ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਲਾਈਸੇਟ ਵਿਚਲੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਤੱਤ ਤੁਰੰਤ ਅੰਦਰੂਨੀ ਆਰਨੇਜ਼ ਨੂੰ ਰੋਕ ਦਿੰਦੇ ਹਨ, ਇਸਲਈ ਆਰਐਨਏ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ।ਕਹਿਣ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਲਾਈਸੇਟ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕਰ ਲੈਂਦੇ ਹਨ, ਉਹਨਾਂ ਦਾ ਆਰਐਨਏ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਡਿਗਰੇਡ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ;ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਟਿਸ਼ੂ ਵਿਚਲੇ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਡੀਗਰੇਡ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿਚਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਸੈਟ ਨਾਲ ਜਲਦੀ ਸੰਪਰਕ ਕਰਨਾ ਆਸਾਨ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ।ਕਾਫ਼ੀ ਸੰਪਰਕ ਦੇ ਕਾਰਨ.ਇਸ ਲਈ,ਇਹ ਮੰਨ ਕੇ ਕਿ ਆਰਐਨਏ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹੋਏ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਦਾ ਇੱਕ ਤਰੀਕਾ ਹੈ, ਪਤਨ ਦੀ ਸਮੱਸਿਆ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਮਿਲਿੰਗ ਸਭ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਅਜਿਹੀ ਵਿਧੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਮਿਲਿੰਗ ਵਿਧੀ ਬਹੁਤ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਜਦੋਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵੱਡੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਨੇ ਅਗਲੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਚੀਜ਼ ਨੂੰ ਜਨਮ ਦਿੱਤਾ: ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ।ਦhomogenizerਵਿਧੀ ਇਸ ਸਵਾਲ 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ ਹੈ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਨਾਲ ਸੰਪਰਕ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ RNase ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਰੋਕਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਇਹ ਪ੍ਰਾਰਥਨਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਵਿਘਨ ਦੀ ਦਰ ਉਸ ਦਰ ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ ਹੈ ਜਿਸ 'ਤੇ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਆਰਨੇਸ ਆਰਐਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ।

ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਬਿਹਤਰ ਹੈ,ਅਤੇ ਗਲਾਸ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਮਾੜਾ ਹੈ, ਪਰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਵਿਧੀ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਦੀ ਘਟਨਾ ਨੂੰ ਰੋਕ ਨਹੀਂ ਸਕਦੀ।ਇਸ ਲਈ, ਜੇਕਰ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਡੀਗਰੇਡ ਹੈ, ਤਾਂ ਅਸਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਨੂੰ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਪੀਸਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ;ਅਸਲੀ ਗਲਾਸ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਨੂੰ ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਹੋਮੋਜੀਨਾਈਜ਼ਰ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਸਮੱਸਿਆ ਲਗਭਗ 100% ਸੰਭਵ ਹੈ.ਹੱਲ ਕਰੋ.

ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਅਸ਼ੁੱਧਤਾ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀ ਸਮੱਸਿਆ ਦੇ ਵਿਨਾਸ਼ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਵਿਭਿੰਨ ਕਾਰਨ ਹਨ, ਅਤੇ ਹੱਲ ਵੀ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵੱਖਰੇ ਹਨ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ,ਜੇਕਰ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਬਕਾਇਆ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਹਨ, ਤਾਂ ਖਾਸ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਲਈ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਵਿਧੀ/ਰੀਏਜੈਂਟ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਤੁਹਾਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਲਈ ਆਪਣੇ ਕੀਮਤੀ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ: ਤੁਸੀਂ ਬਾਜ਼ਾਰ ਤੋਂ ਮੱਛੀ/ਚਿਕਨ ਵਰਗੇ ਕੁਝ ਛੋਟੇ ਜਾਨਵਰ ਖਰੀਦ ਸਕਦੇ ਹੋ, RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਅਨੁਸਾਰੀ ਹਿੱਸਾ ਲੈ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੱਢਣ ਲਈ ਦੂਜਾ ਹਿੱਸਾ - ਮੂੰਹ, ਪੇਟ ਅਤੇ ਅੰਤੜੀਆਂ ਨਾਲ ਪੀਸ ਸਕਦੇ ਹੋ।

ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਕੀਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਟੀਚਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਫਾਲੋ-ਅੱਪ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਵੱਖਰੀਆਂ ਹਨ

cDNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਉਸਾਰੀ ਲਈ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੇ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ RNA ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ;ਉੱਤਰੀ ਨੂੰ ਉੱਚ ਆਰਐਨਏ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਲਈ ਘੱਟ ਲੋੜਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ;RT-PCR ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ RNA ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ,ਪਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਸਖ਼ਤ ਹਨ।ਇੰਪੁੱਟ ਆਉਟਪੁੱਟ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦਾ ਹੈ;ਹਰ ਵਾਰ ਜਦੋਂ ਟੀਚਾ ਉੱਚਤਮ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਆਰਐਨਏ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸ ਨਾਲ ਲੋਕਾਂ ਅਤੇ ਪੈਸੇ ਦੀ ਲਾਗਤ ਆਵੇਗੀ।

ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਸੰਗ੍ਰਹਿ/ਸਟੋਰੇਜ

ਗਿਰਾਵਟ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਜੀਵਤ ਸਰੀਰ/ਜਾਂ ਮੂਲ ਵਿਕਾਸ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਛੱਡਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਮੂਨੇ ਵਿਚਲੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰ ਦੇਣਗੇ,ਅਤੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਰੇਟ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।ਰਵਾਇਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕਣ ਦੇ ਸਿਰਫ ਦੋ ਤਰੀਕੇ ਹਨ: ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਅਤੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਸਮਰੂਪ ਕਰੋ;ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟੋ ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਵਿੱਚ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕਰੋ।ਦੋਨੋ ਪਹੁੰਚ ਤੇਜ਼ ਕਾਰਵਾਈ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ.ਬਾਅਦ ਵਾਲਾ ਨਮੂਨਾ ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾ ਸਿਰਫ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਘੱਟ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ ਢੁਕਵਾਂ ਹੈ ਅਤੇ ਸਮਰੂਪ ਕਰਨਾ ਆਸਾਨ ਹੈ।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ, ਜਿਗਰ, ਥਾਈਮਸ, ਪੈਨਕ੍ਰੀਅਸ, ਤਿੱਲੀ, ਦਿਮਾਗ, ਚਰਬੀ, ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਟਿਸ਼ੂ, ਆਦਿ ਨੂੰ ਅੱਗੇ ਵਧਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਵਿਖੰਡਨ ਅਤੇ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ

ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਯੀਲਡ ਸੈਂਪਲ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕ ਹਨਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਲਈ, ਜੋ ਕਿ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਸੰਪੂਰਨ ਅਤੇ ਸੰਪੂਰਨ ਰੀਲੀਜ਼ ਲਈ ਹੈ।ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਟੁੱਟੇ ਸਿੱਧੇ ਹੀ ਸਮਰੂਪ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਟਿਸ਼ੂ ਟੁੱਟਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੀ ਸਮਰੂਪ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਖਮੀਰ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਸਮਰੂਪ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਅਨੁਸਾਰੀ ਪਾਚਕ ਨਾਲ ਤੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਹੇਠਲੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਆਸਾਨ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਦੁਆਰਾ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਕੁਚਲਿਆ ਅਤੇ ਸਮਰੂਪ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ;ਪੌਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ, ਜਿਗਰ, ਥਾਈਮਸ, ਪੈਨਕ੍ਰੀਅਸ, ਤਿੱਲੀ, ਦਿਮਾਗ, ਚਰਬੀ, ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਨਮੂਨੇ, ਉਹ ਜਾਂ ਤਾਂ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਾਂ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਸਮਰੂਪ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ,ਇਸ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿਘਨ ਅਤੇ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ.ਫਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲਾਭਕਾਰੀ ਤਰੀਕਾ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਮਿਲਿੰਗ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਤਰੀਕਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਹੈ।ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਦੇ ਨਾਲ ਮਿਲਿੰਗ ਬਾਰੇ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਨੋਟ: ਪੂਰੀ ਮਿਲਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪਿਘਲਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਣ 'ਤੇ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਕੰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਚੋਣ

ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਅਤੇ ਬਕਾਇਆ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਦੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨਾ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਲਾਈਸਿਸ ਹੱਲ ਲਗਭਗ RNase ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਇੱਕ lysis ਹੱਲ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਦਾ ਮੁੱਖ ਨੁਕਤਾ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਵਿਧੀ ਦੇ ਨਾਲ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਵਿਚਾਰ ਕਰਨਾ ਹੈ.ਇੱਕ ਅਪਵਾਦ ਹੈ:ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਉੱਚ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਫਿਨੋਲ ਵਾਲੇ ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਵਿਧੀ ਦੀ ਚੋਣ

ਕਾਰਕ ਜੋ ਬਕਾਇਆ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਕੱਢਣ ਦੀ ਗਤੀ ਸਾਫ਼ ਨਮੂਨਿਆਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ, ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਨਤੀਜੇ ਲਗਭਗ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਵਿਧੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਪਰ ਕਈ ਹੋਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੌਦੇ, ਜਿਗਰ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਆਦਿ ਲਈ, ਇੱਕ ਢੁਕਵੀਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਵਿਧੀ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।ਕਾਲਮ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ ਕੱਢਣ ਦੀ ਗਤੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜੋ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਪਰ ਇਹ ਮਹਿੰਗਾ ਹੈ (ਫੋਰਜੀਨ ਲਾਗਤ-ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਕਿੱਟਾਂ ਦੀ ਪੇਸ਼ਕਸ਼ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਹੋਰ ਵੇਰਵੇ ਕਲਿੱਕ ਕਰੋਇਥੇ);ਕਿਫਾਇਤੀ ਅਤੇ ਕਲਾਸਿਕ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਣ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ LiCl ਵਰਖਾ, ਵੀ ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਕਾਰਵਾਈ ਦਾ ਸਮਾਂ ਲੰਬਾ ਹੈ।.

ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਲਈ "ਤਿੰਨ ਅਨੁਸ਼ਾਸਨ ਅਤੇ ਅੱਠ ਧਿਆਨ"

ਅਨੁਸ਼ਾਸਨ 1:exogenous ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰੋ.

ਨੋਟ 1:ਸਖ਼ਤੀ ਨਾਲ ਮਾਸਕ ਅਤੇ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨੋ।

ਨੋਟ 2:ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਟਿਪ ਹੈਡਜ਼, ਪਾਈਪੇਟ ਰਾਡਾਂ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਟੈਂਕ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਬੈਂਚਾਂ ਦਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਿਪਟਾਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

ਨੋਟ 3:ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਰੀਐਜੈਂਟਸ/ਹੱਲ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਪਾਣੀ, RNase-ਮੁਕਤ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।

ਅਨੁਸ਼ਾਸਨ 2:ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਲੌਕ ਕਰੋ

ਨੋਟ 4:ਇੱਕ ਢੁਕਵੀਂ ਸਮਰੂਪਤਾ ਵਿਧੀ ਚੁਣੋ।

ਨੋਟ 5:ਇੱਕ ਉਚਿਤ lysate ਚੁਣੋ.

ਨੋਟ 6:ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰੋ।

ਅਨੁਸ਼ਾਸਨ 3:ਆਪਣੇ ਕੱਢਣ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰੋ

ਨੋਟ 7:ਕਿਸੇ ਵੀ ਲਾਈਸੇਟ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਨੇੜੇ ਪਹੁੰਚਣ ਦੇ ਨਾਲ, ਕੱਢਣ ਦੀ ਸਫਲਤਾ ਦੀ ਦਰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।

ਨੋਟ 8:ਸਫਲ RNA ਕੱਢਣ ਦਾ ਇੱਕੋ ਇੱਕ ਆਰਥਿਕ ਮਾਪਦੰਡ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸਫਲਤਾ ਹੈ, ਉਪਜ ਨਹੀਂ।

RNase ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਸਿਖਰ ਦੇ 10 ਸਰੋਤ

1. ਉਂਗਲਾਂ ਬਾਹਰੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦਾ ਪਹਿਲਾ ਸਰੋਤ ਹਨ, ਇਸਲਈ ਦਸਤਾਨੇ ਪਹਿਨਣੇ ਅਤੇ ਅਕਸਰ ਬਦਲਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਾਸਕ ਵੀ ਪਹਿਨਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਕਿਉਂਕਿ ਸਾਹ ਲੈਣਾ ਵੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਰੋਤ ਹੈ।ਗਲੋਵ ਮਾਸਕ ਪਹਿਨਣ ਦਾ ਇੱਕ ਵਾਧੂ ਫਾਇਦਾ ਪ੍ਰਯੋਗਕਰਤਾ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਕਰਨਾ ਹੈ।

2. ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ, ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਪਾਈਪੇਟਸ - RNase ਨੂੰ ਇਕੱਲੇ ਨਸਬੰਦੀ ਦੁਆਰਾ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਦਾ DEPC ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਭਾਵੇਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ DEPC ਦੁਆਰਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਵਜੋਂ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੋਵੇ।ਵਿਸ਼ੇਸ਼-ਉਦੇਸ਼ ਵਾਲੇ ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਨੂੰ 75% ਅਲਕੋਹਲ ਕਪਾਹ ਦੀ ਗੇਂਦ ਨਾਲ ਪੂੰਝੋ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਡੰਡੇ;ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਹੈੱਡ ਰਿਮੂਵਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾ ਕਰਨਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ।

3. ਪਾਣੀ/ਬਫਰ RNase ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

4. ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਟੈਸਟ ਟੇਬਲ ਨੂੰ 75% ਅਲਕੋਹਲ ਵਾਲੇ ਸੂਤੀ ਬਾਲਾਂ ਨਾਲ ਸਾਫ਼ ਕਰਨਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

5.Endogenous RNase ਸਾਰੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇਸਲਈ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਠੰਢਾ ਕਰਨਾ ਪਤਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਤਰੀਕਾ ਹੈ।ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਸਟੋਰੇਜ/ਪੀਸਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਸੱਚਮੁੱਚ ਅਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਹੈ, ਪਰ ਇਹ ਅੰਤਲੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰਾਂ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ ਇੱਕੋ ਇੱਕ ਤਰੀਕਾ ਹੈ।

6. RNA ਨਮੂਨੇ RNA ਕੱਢਣ ਵਾਲੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿੱਚ RNase ਗੰਦਗੀ ਦੇ ਨਿਸ਼ਾਨ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।

7. ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਅਕਸਰ RNA ਨੂੰ ਡੀਗਰੇਡ ਕਰਨ ਲਈ Rnase ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਬਚੇ Rnase ਨੂੰ Proteinase K ਨਾਲ ਹਜ਼ਮ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਅਤੇ PCI ਦੁਆਰਾ ਕੱਢਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

8. RNA ਸਟੋਰੇਜ਼ ਭਾਵੇਂ ਇਹ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, RNase ਦੀ ਟਰੇਸ ਮਾਤਰਾ RNA ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀ ਹੈ।RNA ਦੀ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸੰਭਾਲ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੱਲ ਇੱਕ ਲੂਣ/ਅਲਕੋਹਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਅਲਕੋਹਲ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨਾਂ 'ਤੇ ਸਾਰੀਆਂ ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।

9. ਜਦੋਂ ਕੈਸ਼ਨਾਂ (Ca, Mg) ਵਿੱਚ ਇਹ ਆਇਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 80C 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰਨ ਨਾਲ RNA ਕਲੀਵ ਹੋ ਜਾਵੇਗਾ, ਇਸਲਈ ਜੇਕਰ RNA ਨੂੰ ਗਰਮ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਚਾਅ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਚੀਲੇਟਿੰਗ ਏਜੰਟ (1mm Sodium Citrate, pH 6.4) ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

10. ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ RNase ਦੁਆਰਾ ਦੂਸ਼ਿਤ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।

RNA ਕੱਢਣ ਲਈ 10 ਸੁਝਾਅ

1: RNase ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਰੋਕੋ।ਨਮੂਨੇ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ RNase ਨੂੰ lysis ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਤੇਜ਼ ਕਾਰਵਾਈ ਦੁਆਰਾ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

2: ਉੱਚ ਰਾਈਬੋਜ਼ਾਈਮ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂ ਲਈ ਇੱਕ ਢੁਕਵਾਂ ਕੱਢਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਚੁਣੋ, ਅਤੇ ਐਡੀਪੋਜ਼ ਟਿਸ਼ੂ ਲਈ ਫਿਨੋਲ ਵਾਲੀ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।

3: ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਉੱਤਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, cDNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਉਸਾਰੀ ਲਈ ਉੱਚ ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਅਤੇ RT-PCR ਅਤੇ RPA (Ribonuclease ਪ੍ਰੋਟੈਕਸ਼ਨ ਅਸੇ) ਨੂੰ ਉੱਚ ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ।RT-PCR ਨੂੰ ਉੱਚ ਸ਼ੁੱਧਤਾ (ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਅਵਸ਼ੇਸ਼) ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

4: ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਉਪਜ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਅਤੇ ਗਿਰਾਵਟ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦੀ ਕੁੰਜੀ ਹੈ।

5: RNA ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਖੋਜ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰੋ, 28S: 18S = 2:1 ਇੱਕ ਸੰਪੂਰਨ ਚਿੰਨ੍ਹ ਹੈ, 1:1 ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਵੀ ਸਵੀਕਾਰਯੋਗ ਹੈ।

6: RT-PCR ਲਈ DNA ਨੂੰ ਹਟਾਉਣਾ, ਐਰੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ DNA ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ Dnase I ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।

7: ਬਾਹਰੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਘਟਾਓ - ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਬਾਹਰੋਂ ਆਯਾਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।

8: ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਇੱਕ ਸਹਿ-ਵਰਖਾ ਰੀਐਜੈਂਟ ਜੋੜਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।ਪਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ਰੱਖਣ ਵਾਲੇ ਸਹਿ-ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ.

9: ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭੰਗ ਕਰੋ, ਜੇ ਲੋੜ ਹੋਵੇ, 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰੋ।

ਢੁਕਵੀਂ ਸਟੋਰੇਜ ਵਿਧੀ

ਇਸਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ -20C 'ਤੇ, ਅਤੇ -80C 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।RNA ਪੈਦਾਵਾਰ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਦਾ ਪਹਿਲਾ ਕਦਮ ਇਹ ਮਹਿਸੂਸ ਕਰਨਾ ਹੈ ਕਿ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ RNA ਸਮੱਗਰੀ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਉੱਚ ਭਰਪੂਰਤਾ (2-4ug/mg) ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਜਿਗਰ, ਪੈਨਕ੍ਰੀਅਸ, ਦਿਲ, ਮੱਧਮ ਭਰਪੂਰਤਾ (0.05-2ug/mg) ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਦਿਮਾਗ, ਭਰੂਣ, ਗੁਰਦੇ, ਫੇਫੜੇ, ਥਾਈਮਸ, ਅੰਡਾਸ਼ਯ, ਘੱਟ ਭਰਪੂਰਤਾ (<0.05ug/mg) mg) ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬਲੈਡਰ, ਹੱਡੀ, ਚਰਬੀ।

1: RN ਨੂੰ ਛੱਡਣ ਲਈ ਲਾਈਜ਼ ਸੈੱਲ - ਜੇਕਰ RNA ਜਾਰੀ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਉਪਜ ਘੱਟ ਜਾਵੇਗੀ।ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਹੋਰ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲੋਂ ਬਿਹਤਰ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਸ ਨੂੰ ਹੋਰ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਵੀ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਮੈਸ਼ਿੰਗ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪਾਚਨ (ਲਾਈਸੋਜ਼ਾਈਮ/ਲਾਇਟਿਕਸ)

2: ਕੱਢਣ ਦੀ ਵਿਧੀ ਦਾ ਅਨੁਕੂਲਨ।ਫਿਨੋਲ-ਆਧਾਰਿਤ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੀ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਅਧੂਰੀ ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਅਤੇ ਅੰਸ਼ਕ ਆਰਐਨਏ ਨੁਕਸਾਨ ਹਨ (ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾਇਆ ਨਹੀਂ ਜਾ ਸਕਦਾ)।ਅਧੂਰਾ ਪੱਧਰੀਕਰਨ ਉੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਵਰਤੇ ਗਏ ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾ ਕੇ ਜਾਂ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਕੱਢਣ ਦਾ ਇੱਕ ਕਦਮ ਐਡੀਪੋਜ਼ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਬੈਕ-ਪੰਪਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਜੈਵਿਕ ਪਰਤ ਨੂੰ ਹਟਾ ਕੇ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕਾਲਮ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੀ ਸਮੱਸਿਆ ਵਾਧੂ ਨਮੂਨਾ ਹੈ।

ਕਲਾਸਿਕ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਸੁਝਾਅ

1. ਫਿਨੋਲ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ: 1:1 ਫਿਨੋਲ/ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਦੀ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਪਾਓ ਅਤੇ 1-2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਮਿਲਾਓ।2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਹਾਈ ਸਪੀਡ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ (80-90%) ਨੂੰ ਹਟਾਓ.ਕਦੇ ਵੀ ਮੱਧ ਪਰਤ 'ਤੇ ਨਾ ਜਾਓ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਘੋਲ ਦੀ ਇੱਕ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਫੀਨੋਲ/ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਉਪਜ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਵਰਖਾ ਲਈ ਦੋ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠੇ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਮਿਲਾਉਂਦੇ ਸਮੇਂ ਬਹੁਤ ਕੋਮਲ ਨਾ ਬਣੋ, ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਨਾ ਕਰੋ।

2. 70-80% ਈਥਾਨੌਲ ਨਾਲ ਧੋਣਾ: ਧੋਣ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਮੁਅੱਤਲ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬਚਿਆ ਲੂਣ ਧੋਤਾ ਜਾਵੇ।ਉਸੇ ਸਮੇਂ, ਈਥਾਨੌਲ ਨੂੰ ਡੋਲ੍ਹਣ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ, ਕੁਝ ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਤੇਜ਼ ਰਫਤਾਰ ਨਾਲ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਪਾਈਪੇਟ ਨਾਲ ਬਚੇ ਹੋਏ ਈਥਾਨੌਲ ਨੂੰ ਹਟਾਓ।ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5-10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਖੜ੍ਹੇ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਭੰਗ ਕਰੋ.

11. ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੰਸਥਾਵਾਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣਾ

1. ਰੇਸ਼ੇਦਾਰ ਟਿਸ਼ੂ: ਰੇਸ਼ੇਦਾਰ ਟਿਸ਼ੂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਦਿਲ/ਪਿੰਜਰ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਦੀ ਕੁੰਜੀ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਗਾੜਨਾ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਸੈੱਲ ਘਣਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਯੂਨਿਟ ਭਾਰ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘੱਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਠੰਢ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪੀਸਣਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ।

2. ਉੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ/ਚਰਬੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂ: ਦਿਮਾਗ/ਸਬਜ਼ੀਆਂ ਦੀ ਚਰਬੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਈ ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਿੱਚ ਚਿੱਟੇ ਫਲੌਕਸ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਕੱਢਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।

3. ਉੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ/ਰਾਈਬੋਜ਼ਾਈਮ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂ: ਤਿੱਲੀ/ਥਾਈਮਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਰਾਈਬੋਜ਼ਾਈਮ ਸਮੱਗਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਠੰਢ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਪੀਸਣਾ ਅਤੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਰਾਈਬੋਜ਼ਾਈਮਜ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜੇ ਲਾਈਸੇਟ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਲੇਸਦਾਰ ਹੈ (ਉੱਚ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਕਾਰਨ), ਪੀਸੀਆਈ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪੱਧਰਾ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗਾ;ਹੋਰ lysate ਸ਼ਾਮਿਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਇਸ ਮੁੱਦੇ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.ਮਲਟੀਪਲ ਪੀਸੀਆਈ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਵਧੇਰੇ ਬਚੇ ਹੋਏ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਜੇ ਅਲਕੋਹਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਚਿੱਟਾ ਪਰੀਪੀਟੇਟ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਘੁਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਸਿਡਿਕ ਪੀਸੀਆਈ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਕੱਢਣਾ ਡੀਐਨਏ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।

4. ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ: ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪੌਦੇ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਜ਼ਮੀਨ 'ਤੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇਸਲਈ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਆਰਐਨਏ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਅਸਧਾਰਨ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਸਮੱਸਿਆ ਦਾ ਹੱਲ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਲਗਭਗ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦਾ ਕਾਰਨ ਅਕਸਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹਨਾਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਨਾਲ ਕੁਝ ਸਮਾਨਤਾਵਾਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ: ਤੁਸੀਂ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹੋ ਅਤੇ ਮੈਂ ਛਾਣਦਾ ਹਾਂ, ਅਤੇ ਤੁਸੀਂ ਸੋਖਦੇ ਹੋ ਅਤੇ ਮੈਂ ਸੋਖਦਾ ਹਾਂ।ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ ਕਿ ਉਹ ਬਹੁਤ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹਨ।

ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, ਵਪਾਰਕ ਆਰਐਨਏ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਛੋਟੇ ਸਮਾਯੋਜਨਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਲਗਭਗ ਸਾਰੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਕੁਝ ਵਪਾਰਕ ਆਰਐਨਏ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਹਨ ਜੋ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਲਈ ਢੁਕਵੇਂ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਖੁਸ਼ਕਿਸਮਤੀ ਨਾਲ, ਫੋਰਜੀਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈਪਲਾਂਟ ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਵਾਲੀਆਂ ਕਿੱਟਾਂ, ਸਾਡੇ ਕੋਲਪਲਾਂਟ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ, ਪਲਾਂਟ ਟੋਟਲ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਪਲੱਸ.ਬਾਅਦ ਵਾਲਾ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚ ਪੋਲੀਸੈਕਰਾਈਡ ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।RNA ਕੱਢਣ ਲਈ, ਲੈਬ ਉਪਭੋਗਤਾਵਾਂ ਤੋਂ ਫੀਡਬੈਕ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧੀਆ ਹੈ।

12. ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਜੰਮਣ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਜੰਮਿਆ ਹੋਇਆ ਨਮੂਨਾ ਵੱਡਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕੱਟਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਕਟਾਈ ਦੌਰਾਨ ਨਮੂਨੇ ਪਿਘਲ ਜਾਂਦੇ ਹਨ (ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ' ਤੇ)।RNA ਕੱਢਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਜੰਮੇ ਹੋਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਤੋਲਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੌਰਾਨ ਪਿਘਲਣਾ ਯਕੀਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਾਪਰੇਗਾ।ਕਈ ਵਾਰ, ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਪਿਘਲਣਾ ਵੀ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਮਿਲਿੰਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ;ਜਾਂ ਜੰਮੇ ਹੋਏ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਮਿਲਿੰਗ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧਾ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪਿਘਲਣਾ ਯਕੀਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੂਰੀ ਸਮਰੂਪਤਾ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਵਾਪਰਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਜੰਮੇ ਹੋਏ ਟਿਸ਼ੂ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨਾਲੋਂ ਪਿਘਲਣ ਦੌਰਾਨ ਆਰਐਨਏ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਸੰਭਾਵਿਤ ਕਾਰਨ: ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਸੈੱਲ ਦੇ ਅੰਦਰ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਵਿਗਾੜ ਦਿੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਐਂਜ਼ਾਈਮਜ਼ ਦਾ RNA ਨਾਲ ਸਿੱਧੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਆਉਣਾ ਆਸਾਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।

13. RNA ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਨਿਰਣਾ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ RNA ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦਾ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ A260/A280 ਦੀ ਵਰਤੋਂ RNA ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਦਾ ਨਿਰਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਸਿਧਾਂਤ ਵਿੱਚ, ਬਰਕਰਾਰ RNA ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ 28S:18S = 2.7:1 ਹੈ, ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਡੇਟਾ 28S:18S = 2:1 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਜ਼ੋਰ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਤੱਥ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ ਹੋਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਕੱਢੇ ਗਏ ਲਗਭਗ ਕੋਈ ਵੀ ਆਰਐਨਏ 2:1 ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਹੈ (ਇਹ ਐਗਿਲੈਂਟ ਬਾਇਓਐਨਲਾਈਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ)।

RNA ਦੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਨਤੀਜੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ, ਨਮੂਨਾ ਲੋਡ, EB ਦੁਆਰਾ ਸੰਤ੍ਰਿਪਤਾ ਦੀ ਡਿਗਰੀ, ਆਦਿ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਜੇਕਰ 2kb 'ਤੇ 28S ਅਤੇ 0.9kb 'ਤੇ 18S ਸਪੱਸ਼ਟ ਹਨ, ਅਤੇ 28S: 18S > 1, ਤਾਂ ਇਕਸਾਰਤਾ ਸਭ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।

A260/A280 ਇੱਕ ਸੂਚਕ ਹੈ ਜਿਸਨੇ ਬਹੁਤ ਉਲਝਣਾਂ ਪੈਦਾ ਕੀਤੀਆਂ ਹਨ।ਸਭ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਲਈ ਇਸ ਸੂਚਕ ਦੇ ਅਸਲ ਅਰਥ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ: ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ, ਇਸਦਾ A260/280 = ਲਗਭਗ 2.0।ਸ਼ੁੱਧ RNA 'ਕਾਰਨ' ਹੈ ਅਤੇ A260/A280 = 2 'ਪ੍ਰਭਾਵ' ਹੈ।ਹੁਣ ਹਰ ਕੋਈ A260/A280 ਨੂੰ 'ਕਾਰਨ' ਵਜੋਂ ਵਰਤ ਰਿਹਾ ਹੈ, ਇਹ ਸੋਚ ਕੇ ਕਿ "ਜੇ A260/A280 = 2, ਤਾਂ RNA ਸ਼ੁੱਧ ਹੈ", ਜੋ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਲਝਣ ਵੱਲ ਖੜਦਾ ਹੈ।

ਜੇ ਤੁਸੀਂ ਦਿਲਚਸਪੀ ਰੱਖਦੇ ਹੋ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਆਪਣੇ ਆਰਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਥੋੜਾ ਜਿਹਾ ਰੀਐਜੈਂਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹੋ ਜੋ ਅਕਸਰ ਕੱਢਣ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਫਿਨੋਲ, ਗੁਆਨੀਡੀਨ ਆਈਸੋਥੀਓਸਾਈਨੇਟ, ਪੀਈਜੀ, ਆਦਿ, ਅਤੇ ਫਿਰ A260/A280 ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਮਾਪੋ।ਅਸਲੀਅਤ ਇਹ ਹੈ ਕਿ RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟ, ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ, A260 ਅਤੇ A280 ਦੇ ਆਲੇ-ਦੁਆਲੇ ਸੋਖ ਲੈਂਦੇ ਹਨ, A260/A280 ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।

ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਸਿੱਖਿਆਦਾਇਕ ਪਹੁੰਚ 200-300 nm ਸੀਮਾ ਵਿੱਚ RNA ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸਕੈਨ ਕਰਨਾ ਹੈ।ਸ਼ੁੱਧ RNA ਦੀ ਵਕਰ ਵਿੱਚ ਹੇਠ ਲਿਖੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ: ਕਰਵ ਨਿਰਵਿਘਨ ਹੈ, A230 ਅਤੇ A260 ਦੋ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਪੁਆਇੰਟ ਹਨ, A300 0 ਦੇ ਨੇੜੇ ਹੈ, A260/A280 = ਲਗਭਗ 2.0, ਅਤੇ A260/A230 = ਲਗਭਗ 2.0।ਜੇਕਰ ਸਕੈਨ ਡੇਟਾ ਉਪਲਬਧ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ A260/A230 ਅਨੁਪਾਤ ਵੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਅਨੁਪਾਤ ਸਾਰੀਆਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਚੁੱਕਣ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਡਿਵਾਈਸ ਦੀ ਲੀਨੀਅਰ ਰੇਂਜ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ (A260 ਲਈ 0.1–0.5)।

ਦੋ ਹੋਰ ਉਪਯੋਗੀ ਵਰਤਾਰੇ ਹਨ: ਜਦੋਂ A260/A280 ਨੂੰ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਅਨੁਪਾਤ ਲਗਭਗ 0.3 ਘੱਟ ਹੋਵੇਗਾ;ਜਦੋਂ ਕਿ 10 mM EDTA ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਅਨੁਪਾਤ 1 mM EDTA ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਅਨੁਪਾਤ ਨਾਲੋਂ ਲਗਭਗ 0.2 ਵੱਧ ਹੈ।

ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦ:

ਚਾਈਨਾ ਪਲਾਂਟ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਨਿਰਮਾਤਾ ਅਤੇ ਸਪਲਾਇਰ |ਫੋਰਜੀਨ (foreivd.com)

ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਸੀਰੀਜ਼ ਸਪਲਾਇਰ ਅਤੇ ਫੈਕਟਰੀ |ਚੀਨ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਸੀਰੀਜ਼ ਮੈਨੂਫੈਕਚਰਰਜ਼ (foreivd.com)

ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਸੀਰੀਜ਼ - ਫੋਰਜੀਨ ਕੰਪਨੀ, ਲਿਮਿਟੇਡ (foreivd.com)