A260/A230 ਦਾ ਘੱਟ ਅਨੁਪਾਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 230nm 'ਤੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਮਾਈ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੀ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਆਓ ਦੇਖੀਏ ਕਿ ਇਹਨਾਂ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਕੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ:

• ਆਮ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕ	ਸਮਾਈ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ	ਅਨੁਪਾਤ ਪ੍ਰਭਾਵ
  ਪ੍ਰੋਟੀਨ	~230nm ਅਤੇ 280nm	ਏ ਦੀ ਸਮਕਾਲੀ ਕਮੀ260/A 280ਅਤੇ ਏ260/A 280ਅਨੁਪਾਤ
  ਗੁਆਨੀਡੀਨ ਲੂਣ	220-240 ਐੱਨ.ਐੱਮ	ਏ ਨੂੰ ਘਟਾਓ260/A 280ਅਨੁਪਾਤ
  ਫਿਨੋਲ	~270nm	-
  ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ	~230nm ਅਤੇ 270nm	ਏ ਨੂੰ ਘਟਾਓ260/A 280ਅਨੁਪਾਤ
  EDTA	~230nm	ਏ ਨੂੰ ਘਟਾਓ260/A 280ਅਨੁਪਾਤ
  ਈਥਾਨੌਲ	230-240 ਐੱਨ.ਐੱਮ	ਏ ਨੂੰ ਘਟਾਓ260/A 280ਅਨੁਪਾਤ

 
 
 
ਆਮ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਕਾਂ ਦੀ ਸਮਾਈ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਵਿਪਰੀਤ ਮੁੱਲ

Pਰੋਟੀਨ ਗੰਦਗੀ
ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਮੰਨਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਉਪਰਲੇ ਜਲਮਈ ਪੜਾਅ ਅਤੇ ਹੇਠਲੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮੌਜੂਦ ਹੈਜੈਵਿਕਪੜਾਅਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ A260/A280 ਅਤੇ A260/A230 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ, ਅਤੇ A260/A230 ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ A260/A280 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਸਪੱਸ਼ਟ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਵੇਗਾ।
ਬਾਅਦ ਦੇ ਦੌਰਾਨਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀor qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜਾਂ ਦਖਲ ਦੇ ਸਕਦੀ ਹੈ.ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਬਚਣ ਦਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਤਰੀਕਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦੀ ਇੱਛਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ "ਵੱਧ ਤੋਂ ਘੱਟ, ਕਈ ਵਾਰ ਥੋੜ੍ਹੀ ਮਾਤਰਾ" ਦੇ ਸਿਧਾਂਤ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣਾ ਹੈ।

2. ਗੁਆਨੀਡੀਨੀਅਮ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ
ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਾਈਡ (GuHCl) ਅਤੇ guanidine thiocyanate (GTC) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੌਰਾਨ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਨਸ਼ਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿਕਾਰ ਅਤੇ ਵਰਖਾ ਹੋ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।GuHCl ਅਤੇ GTC ਦੀ ਸਮਾਈ ਤਰੰਗ ਲੰਬਾਈ 220-240 nm ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੈ, ਅਤੇਬਕਾਇਆ ਗੁਆਨੀਡੀਨੀਅਮ ਲੂਣ A260/A230 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ.ਹਾਲਾਂਕਿ ਬਚੇ ਹੋਏ ਗੁਆਨੀਡੀਨੀਅਮ ਲੂਣ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ,ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ.

3. ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਗੰਦਗੀ
ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਦਾ ਮੁੱਖ ਹਿੱਸਾ ਫਿਨੋਲ ਹੈ।ਫਿਨੋਲ ਦਾ ਮੁੱਖ ਕੰਮ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਜ਼ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡਣਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਫਿਨੋਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਹ RNase ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕ ਨਹੀਂ ਸਕਦਾ।ਇਸਲਈ, 8-ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਕੁਇਨੋਲੀਨ, ਗੁਆਨੀਡੀਨ ਆਈਸੋਥੀਓਸਾਈਨੇਟ, β-ਮਰਕੈਪਟੋਏਥਾਨੋਲ, ਆਦਿ ਨੂੰ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਅਤੇ ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਆਰਨੇਜ਼ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ TRIzol ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਸੈਲੂਲਰ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਐਕਸਟਰੈਕਟ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲਾਈਜ਼ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਕਾਇਆ ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ A260/A230 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ।
ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਵਿਧੀ: ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜਿੰਗ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਵਿੱਚ ਫਿਨੋਲ 4° ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪਾਣੀ ਦੇ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਹੈ।

4. ਈਥਾਨੋਲ ਰਹਿੰਦ
ਈਥਾਨੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਅੰਤਮ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਲੂਣ ਆਇਨਾਂ ਨੂੰ ਭੰਗ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਜੋ ਡੀਐਨਏ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹੇ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਦੀ ਸਮਾਈ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈਦੀ ਸਮਾਈ ਸਿਖਰਈਥਾਨੌਲ 230-240 nm 'ਤੇ ਵੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿA260/A230 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਵੀ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ.
ਈਥਾਨੋਲ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਤੋਂ ਬਚਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਅੰਤਮ ਇਲੂਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ,ਫਿਊਮ ਹੁੱਡਇਲਿਊਸ਼ਨ ਲਈ ਬਫਰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਈਥਾਨੌਲ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭਾਫ਼ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਦੋ ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ।
ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਜਾਣਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਅਨੁਪਾਤ ਕੇਵਲ RNA ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਇੱਕ ਮੁਲਾਂਕਣ ਸੂਚਕਾਂਕ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਗਏ ਓਪਰੇਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਸਖਤੀ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਅਨੁਪਾਤ ਅਤੇ ਮਿਆਰੀ ਰੇਂਜ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਭਟਕਣ ਦਾ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਵੇਗਾ।
ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਤਪਾਦ:
ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ
ਪਲਾਂਟ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ
ਸੈੱਲ ਕੁੱਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ
ਪਲਾਂਟ ਟੋਟਲ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਪਲੱਸ