ਵੱਡੀ ਛੂਟ ਵਾਲਾ ਚੀਨ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਇੱਕ-ਪੜਾਅ ਪੜਤਾਲ Rt-Qpcr Kit V2
ਕਿੱਟ ਦਾ ਵੇਰਵਾ:
◮ਸਰਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ: ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾਲ, ਆਰਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਸਿਰਫ਼ 7 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
◮ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮੰਗ ਛੋਟੀ ਹੈ, ਜਿੰਨਾ ਘੱਟ 10 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
◮ਉੱਚ ਥ੍ਰੋਪੁੱਟ: ਇਹ 384, 96, 24, 12, 6-ਵੈਲ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਖੋਜ ਸਕਦਾ ਹੈ।
◮ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ ਜਲਦੀ ਹੀ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
◮ਅਨੁਕੂਲਿਤ RT ਅਤੇ qPCR ਸਿਸਟਮ ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-PCR ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਕੁਸ਼ਲ ਅਤੇ PCR ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਖਾਸ, ਅਤੇ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਨੂੰ ਤਜਰਬੇਕਾਰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.ਵੱਡੀ ਛੂਟ ਵਾਲੇ ਚੀਨ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦੀ ਪੜਤਾਲ Rt- ਲਈ ਇਸਦੇ ਮਾਰਕੀਟ ਦੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਮਾਣੀਕਰਣਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਮਤ ਜਿੱਤਣਾQpcrਕਿੱਟ V2, ਕੁਆਲਿਟੀ ਫੈਕਟਰੀ ਦੀ ਜ਼ਿੰਦਗੀ ਹੈ, ਗਾਹਕ ਦੀ ਮੰਗ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਤ ਕਰਨਾ ਕੰਪਨੀ ਦੇ ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਦਾ ਸਰੋਤ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਇਮਾਨਦਾਰੀ ਅਤੇ ਚੰਗੇ ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਰਵੱਈਏ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਤੁਹਾਡੇ ਆਉਣ ਦੀ ਉਡੀਕ ਕਰਦੇ ਹਾਂ!
ਸਾਨੂੰ ਤਜਰਬੇਕਾਰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.ਲਈ ਇਸਦੇ ਮਾਰਕੀਟ ਦੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਮਾਣੀਕਰਣਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਮਤ ਜਿੱਤਣਾਚੀਨ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, Qpcr, ਸਾਡੀ ਕੰਪਨੀ ਵਾਅਦਾ ਕਰਦੀ ਹੈ: ਵਾਜਬ ਕੀਮਤਾਂ, ਛੋਟਾ ਉਤਪਾਦਨ ਸਮਾਂ ਅਤੇ ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਵਿਕਰੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੇਵਾ, ਅਸੀਂ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਮੇਂ ਸਾਡੀ ਫੈਕਟਰੀ ਦਾ ਦੌਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸਵਾਗਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਕਾਸ਼ ਹੁਣ ਸਾਡੇ ਕੋਲ ਇੱਕ ਸੁਹਾਵਣਾ ਅਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦਾ ਕਾਰੋਬਾਰ ਹੋਵੇ !!!
ਵਰਣਨ
ਇਹ ਕਿੱਟ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ ਜੋ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਜਾਰੀ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਮਾਂ ਬਰਬਾਦ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਅਤੇ ਮਿਹਨਤੀ ਆਰਐਨਏ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਸਿਰਫ 7 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਕਿੱਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ 5×ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਮਿਕਸ ਅਤੇ 2 × ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਸਲ-ਸਮੇਂ ਦੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ PCR ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
5×ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ ਅਤੇ 2 × ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਵਿੱਚ ਮਜ਼ਬੂਤ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ RT-qPCR ਲਈ ਟੈਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ ਵਿਲੱਖਣ ਆਰਐਨਏ ਹਾਈ-ਐਫੀਨਿਟੀ ਫੋਰਜੀਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ, ਅਤੇ ਹੌਟ ਡੀ-ਟੈਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਡੀਐਨਟੀਪੀਜ਼, ਐਮਜੀਸੀਐਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।2, ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਬਫਰ, ਪੀਸੀਆਰ ਆਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
| ਭਾਗ I | ਬਫਰ CL |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | |
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | |
| ਭਾਗ II | ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ |
| 5× ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ | |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR | |
| 50× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | |
| ਹਦਾਇਤਾਂ | |
ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਫਾਇਦੇ
■ ਸਰਲ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ : ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨਾਲ, ਆਰਐਨਏ ਨਮੂਨੇ ਸਿਰਫ਼ 7 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
■ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮੰਗ ਛੋਟੀ ਹੈ, ਜਿੰਨਾ ਘੱਟ 10 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
■ ਉੱਚ ਥ੍ਰੋਪੁੱਟ: ਇਹ 384, 96, 24, 12, 6-ਵੱਲ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
■ ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
■ ਅਨੁਕੂਲਿਤ RT ਅਤੇ qPCR ਸਿਸਟਮ ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-PCR ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਕੁਸ਼ਲ ਅਤੇ PCR ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਖਾਸ, ਅਤੇ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਕਿੱਟ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਕੋਪ: ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ.
- ਸੈਂਪਲ ਲਾਈਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ RNA: ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੇ ਸਿਰਫ RT-qPCR ਟੈਂਪਲੇਟ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
- ਕਿੱਟ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, siRNA-ਵਿਚੋਲੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ, ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ, ਆਦਿ।
ਚਿੱਤਰ
ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ
ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੇ ਭਾਗ I ਨੂੰ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ;ਭਾਗ II -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II ਨੂੰ 4℃ ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, -20℃ ਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਨਾ ਕਰੋ।
ਰੀਏਜੈਂਟ 2×ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-SYBR ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ -20℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ;ਜੇਕਰ ਅਕਸਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ (10 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਵਰਤੋਂ) ਲਈ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਤਜਰਬੇਕਾਰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਹਾਂ।Wining the majority of the crucial certifications of its market for Big discounting China High Sensitivity One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2, ਕੁਆਲਿਟੀ ਫੈਕਟਰੀ ਦੀ ਜ਼ਿੰਦਗੀ ਹੈ , ਗਾਹਕ ਦੀ ਮੰਗ 'ਤੇ ਫੋਕਸ ਕਰੋ ਕੰਪਨੀ ਦੇ ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਦਾ ਸਰੋਤ ਹੈ, We adhere to honesty and good faith working attitude, looking forward to your comes!
ਵੱਡੀ ਛੋਟਚੀਨ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, Qpcr, ਸਾਡੀ ਕੰਪਨੀ ਵਾਅਦਾ ਕਰਦੀ ਹੈ: ਵਾਜਬ ਕੀਮਤਾਂ, ਛੋਟਾ ਉਤਪਾਦਨ ਸਮਾਂ ਅਤੇ ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਵਿਕਰੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੇਵਾ, ਅਸੀਂ ਤੁਹਾਨੂੰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਮੇਂ ਸਾਡੀ ਫੈਕਟਰੀ ਦਾ ਦੌਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸਵਾਗਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਕਾਸ਼ ਹੁਣ ਸਾਡੇ ਕੋਲ ਇੱਕ ਸੁਹਾਵਣਾ ਅਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦਾ ਕਾਰੋਬਾਰ ਹੋਵੇ !!!
QuickEasyTM Cell Direct RT-qਪੀ.ਸੀ.ਆਰ Kit -ਤਾਕਮan
Cat.No.DRT-01021/01022
≤ 1000,000 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਲਈ
ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਜਾਣ-ਪਛਾਣ
ਇਹ ਉਤਪਾਦ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਜਾਰੀ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਸਮਾਂ ਬਰਬਾਦ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਅਤੇ ਮਿਹਨਤੀ ਆਰਐਨਏ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਲੋੜੀਂਦੇ ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸਿਰਫ 7 ਮਿੰਟ, 5× ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਮਿਕਸ, 2 × ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟਾਇਕ-ਟਾਇਮ-ਟਾਇਕ-ਟਾਇਮੇਂਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਨਤੀਜੇ
5× ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ ਅਤੇ 2 × ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ ਵਿੱਚ ਮਜ਼ਬੂਤ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪਣ ਲਈ ਕੁਸ਼ਲ ਰਿਵਰਸਲ ਅਤੇ ਖਾਸ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿੱਚ ਫੋਰਜੀਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ, ਹੌਟ ਡੀ-ਟੈਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਡੀਐਨਟੀਪੀਜ਼, ਐਮਜੀਸੀਐਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।2, ਰਿਐਕਸ਼ਨ ਬਫਰ, ਪੀਸੀਆਰ ਆਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ, ਜੋ ਕਿ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਅਤੇ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਖੋਜਣ ਲਈ ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਨਾਲ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਉੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ।
ਉਤਪਾਦ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ
ਸਰਲ, ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਜੋ RNA ਨਮੂਨੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ 7 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਘੱਟ ਸਮਾਂ ਲੈਂਦੀ ਹੈ।
ਨਮੂਨੇ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਛੋਟੀਆਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 10 ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ 384, 96, 24, 12, ਅਤੇ 6-ਵੈਲ ਪਲੇਟਾਂ ਦੇ ਤੇਜ਼ ਆਰਐਨਏ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਲਈ ਉੱਚ ਥ੍ਰਰੂਪੁਟ।
ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਹਟਾਉਣ ਦੇ ਯੋਗ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਅਨੁਕੂਲਿਤ RT ਅਤੇ qPCR ਸਿਸਟਮ ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-PCR ਨੂੰ ਵਧੇਰੇ ਕੁਸ਼ਲ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ, ਅਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਕਿੱਟ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਸਕੋਪ: ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ.
ਨਮੂਨਾ ਲਾਈਸਿਸ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕੀਤੀ RNA: ਕੇਵਲ ਇੱਕ ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-qPCR ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਕਿੱਟਾਂ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: ਜੀਨ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਐਲੀਲ ਟੈਸਟਿੰਗ, ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ, ਆਦਿ।
ਕਿੱਟ ਸੀਮਾਵਾਂ
ਵਧੇ ਹੋਏ ਟੁਕੜੇ ≤ 300 bp.
ਕਿੱਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਉਤਪਾਦ ਗੁਣਵੱਤਾ ਕੰਟਰੋਲ
FOREGENE ਦੇ ਕੁੱਲ ਕੁਆਲਿਟੀ ਮੈਨੇਜਮੈਂਟ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਕਿੱਟਾਂ ਦੇ ਹਰੇਕ ਬੈਚ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੀ ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਸੀਰੀਜ਼ ਕਿੱਟਾਂ ਦੇ ਹਰੇਕ ਬੈਚ ਦੀ ਕਈ ਵਾਰ ਸਖ਼ਤੀ ਨਾਲ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਕਿੱਟ ਸਮੱਗਰੀ
| QuickEasyTM ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ-ਟੈਕਮੈਨ | ||||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ 20μl qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ | ਡੀਆਰਟੀ-01021 | ਡੀਆਰਟੀ-01022 | ਨੋਟ ਕਰੋ | |
| 200 ਟੀ | 1000 ਟੀ | |||
| ਭਾਗ I | ਬਫਰ CL | 4 ਮਿ.ਲੀ | 20 ਮਿ.ਲੀ |
ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | 80 μl | 400 μl | ||
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | 400 μl | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | ||
|
ਭਾਗ II | ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ | 80 μl | 400 μl | |
| 5×ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਮਿਕਸ * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਤਕਮਾਨ * | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | 1.7 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 6 | qPCR | |
| 20×ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 1.7 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ | ||
| ਹਦਾਇਤ ਮੈਨੂਅਲ | 1 ਟੁਕੜਾ | 1 ਟੁਕੜਾ | ||
*:ਸੈੱਲ ਲਾਇਸਿਸ, 5×ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਮਿਕਸ, 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ ਨੂੰ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖਰੀਦਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਵੇਰਵੇ ਅੰਤਿਕਾ 1 (ਪੰਨਾ 13) ਵਿੱਚ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਹਨ।
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
1. ਸ਼ਿਪਿੰਗ ਹਾਲਾਤ
ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਆਈਸ ਪੈਕ ਬਾਕਸ ਦੀ ਆਵਾਜਾਈ ਦੀ ਪੂਰੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕਿ ਕਿੱਟ <4 °C ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਹੈ।
2. ਸਟੋਰੇਜ਼ ਹਾਲਾਤ
ਭਾਗ I ਨੂੰ 4°C ਅਤੇ ਭਾਗ II -20°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II ਨੂੰ 4°C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, -20°C 'ਤੇ ਜੰਮਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ।
ਰੀਏਜੈਂਟ 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ ਨੂੰ -20°C, ਜਾਂ 4°C 'ਤੇ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੇਕਰ ਅਕਸਰ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (10 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰ)।
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਦੀ ਜਾਣਕਾਰੀ
ਬਫਰ CL: ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਬਫਰ ST: ਬਾਅਦ ਦੇ RT 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਲਾਈਸੇਟ ਵਿੱਚ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ: ਡੀਐਨਏ ਰੀਮੂਵਰ, ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ 'ਤੇ ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ।
5× ਡਾਇਰੈਕਟ ਆਰਟੀ ਮਿਕਸ: ਅਨੁਕੂਲ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ (ਰੈਂਡਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਓਲੀਗੋ(ਡੀਟੀ) ਲਈ ਉੱਚ ਆਰਐਨਏ ਐਫੀਨਿਟੀ ਫੋਰਜੀਨ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, ਆਰਨੇਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰ, ਡੀਐਨਟੀਪੀ, ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ, ਇਨਹਾਂਸਰਸ, ਆਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ, ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।18ਪ੍ਰਾਈਮਰ)।
ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II: ਲਾਈਸਿਸ ਬਫਰ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਛੱਡਣ ਲਈ ਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ: ਇਸ ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿੱਚ ਗਰਮ D-Taq DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, dNTPs, MgCl ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ2, ਰਿਐਕਸ਼ਨ ਬਫਰ, PCR ਆਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ, ਅਤੇ ਸਟੈਬੀਲਾਈਜ਼ਰ।
20× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ: ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ABI, Stratagene ਅਤੇ ਹੋਰ ਕੰਪਨੀਆਂ ਦੇ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਯੰਤਰਾਂ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਡੋਜ਼ਿੰਗ ਗਲਤੀਆਂ ਕਾਰਨ ਪੀਸੀਆਰ ਟਿਊਬਾਂ ਅਤੇ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਯੰਤਰਾਂ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ 20 × ROX ਸੰਦਰਭ ਡਾਈ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵੱਖਰੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਪਭੋਗਤਾ ਇਸਨੂੰ ਯੰਤਰ ਦੀ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਜੋੜ ਸਕਦਾ ਹੈ।
RNase-ਮੁਕਤ ddH2O: ਦੋ-ਪੜਾਅ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ RNase-ਮੁਕਤ ਨਿਰਜੀਵ ਅਲਟਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਪਾਣੀ।
ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ:(ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਪੜ੍ਹਨਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ)
ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ-ਦੂਸ਼ਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਸੰਚਾਲਨ ਵਿਧੀ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦਿਓ।
RNase ਗੰਦਗੀ ਅਤੇ RNA ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਤੇ ਭਾਂਡਿਆਂ ਦੀ ਸਫਾਈ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦਿਓ।
ਤਾਜ਼ੇ ਜਾਂ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਸੈੱਲ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਲਓ ਅਤੇ ਕਦੇ ਵੀ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪਘਲੇ ਸੈੱਲ ਨਮੂਨੇ ਨਾ ਵਰਤੋ।
5× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ, 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ ਨੂੰ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਤੋਂ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇਹ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰੇਗਾ।
ਪ੍ਰੀਪਾਰਾਸ਼ਨਅੱਗੇਕਾਰਵਾਈ
ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਪੜ੍ਹਨਾ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ।ਸੈੱਲ ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ ਸਧਾਰਨ, ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਅਤੇ ਚਲਾਉਣ ਲਈ ਤੇਜ਼ ਹੈ, ਅਤੇ ਹਦਾਇਤਾਂ ਪੂਰੀ ਕਿੱਟ ਬਾਰੇ ਪੂਰੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਸਹੀ ਵਰਤੋਂ ਕਿਵੇਂ ਕਰਨੀ ਹੈ।ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਲੋੜੀਂਦੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਉਪਕਰਣ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।
ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਉਪਕਰਨ
◆ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਸੈੱਲ।
◆ 1.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਜਾਂ 2 ਮਿ.ਲੀ., RNase-/DNase-ਮੁਕਤ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ, RNase-/DNase-ਮੁਕਤ ਟਿਪ, 0.2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨਿਰਜੀਵ qPCR ਟਿਊਬ।
◆ qPCR ਮਸ਼ੀਨ, ਪਾਈਪੇਟ, ਟੇਬਲਟੌਪ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ (≥13,400 ਹੈ×g) (ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦਾ ਹੈ), ਆਦਿ।
ਸੁਰੱਖਿਆ
◆ ਇਹ ਉਤਪਾਦ ਕੇਵਲ ਵਿਗਿਆਨਕ ਖੋਜ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਹੈ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇਸਨੂੰ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲ, ਕਲੀਨਿਕਲ, ਭੋਜਨ ਅਤੇ ਕਾਸਮੈਟਿਕ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਨਾ ਵਰਤੋ।
◆ ਰਸਾਇਣਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਢੁਕਵੇਂ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਦੇ ਕੱਪੜੇ, ਦਸਤਾਨੇ, ਸੁਰੱਖਿਆ ਸ਼ੀਸ਼ੇ ਆਦਿ ਪਹਿਨੋ।
ਓਪਰੇਸ਼ਨਗਾਈਡ
ਅੰਤਿਕਾ 1 (ਪੰਨਾ 13) ਵਿੱਚ ਵੇਰਵਿਆਂ ਲਈ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਸਿਸਟਮ, RT ਸਿਸਟਮ, ਅਤੇ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਹੱਲ ਪੂਰਕ ਪੈਕ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖਰੀਦੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਗਾਈਡ
A: ਨਮੂਨਾ RNA ਰਿਲੀਜ਼
1. ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੀ-ਟਰੀਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਠੰਡੇ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਧੋਵੋ, ਫਿਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਲਿਜ਼ ਕਰੋ (10-106), 106 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਾਲੋਂ, ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਲਈ ਫੋਰਜੀਨ ਸੈੱਲ ਇੱਕ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਟੋਟਲ (DE-03111) ਜਾਂ ਐਨੀਮਲ ਟੋਟਲ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ (DE-03011) ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
1.1ਅਨੁਕੂਲ ਸੈੱਲ (24- ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ)
1.1.1.ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ, ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ ਕਿ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ 1 × 10 ਹੈ5, ਅਤੇ ਕਲਚਰ ਡਿਸ਼ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਪਾਈਪੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।
1.1.2ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 200 μl ਪ੍ਰੀ-ਚਿੱਲਡ 1 × PBS ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਵਾਰ-ਵਾਰ ਪਾਈਪ ਨਾ ਲਗਾਓ ਅਤੇ ਖੂਹਾਂ ਤੋਂ ਪੀ.ਬੀ.ਐੱਸ.ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਝੁਕਾਓ ਅਤੇ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ PBS ਹਟਾਓ।ਕਦਮ 2 'ਤੇ ਅੱਗੇ ਵਧੋ।
1.1.3ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਡਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਡਿਸ਼ ਜਾਂ ਇੱਕ ਹਵਾਲਾ ਨੰਬਰ ਸਾਰਣੀ 1-1 ਨੂੰ ਸੈੱਲ ਧੋਣ ਲਈ ਪ੍ਰੀ-ਕੂਲਡ 1 × PBS ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਾਰਣੀ1-1: ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਖਿਆ ਲਈ ਪੀਬੀਐਸ ਖੁਰਾਕ
| ਕਲਚਰ ਪਲੇਟ ਦੀ ਕਿਸਮ | ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ / ਖੂਹ | 1 × PBS/ ਖੂਹ |
| 6-ਖੂਹ | 1×106 | 1000 μl |
| 12-ਖੂਹ | 2×105 | 400 μl |
| 24-ਖੂਹ | 105 | 200 μl |
| 96-ਖੂਹ | 104 | 50 μl |
| 384-ਖੂਹ | 5×103 | 25 μl |
ਨੋਟ ਕਰੋ：ਇੱਕ ਫਰਮ ਅਨੁਕੂਲ ਸੈੱਲ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ,ਧੋਣ ਵੇਲੇ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਤੋਂ ਬਚਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
1.2ਮੁਅੱਤਲ ਸੈੱਲ ਜਾਂ ਗੈਰ-ਪੋਰਸ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਅਨੁਪਾਤਕ ਸੈੱਲ
1.2.1.ਗੈਰ-ਮਲਟੀ ਖੂਹ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਅਨੁਪਾਤਕ ਸੈੱਲ (ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਸੈੱਲ ਅਗਲੇ ਪੜਾਅ 1.2.2 ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ), ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਸੈੱਲ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਦੀ ਵਿਧੀ ਅਨੁਸਾਰ ਇਕੱਠੇ ਕਰੋ ਅਤੇ ਵੱਖ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟ ਜਾਂ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ;ਜੇਕਰ ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਲਈ ਅਤੇ ਬਚੇ ਹੋਏ ਟ੍ਰਿਪਸਿਨ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਖਿੰਡਾਉਣ ਲਈ ਪੀਬੀਐਸ ਰੀਸਸਪੈਂਡਡ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
1.2.2.ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੇ ਬਾਅਦ, 1 × 10 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਅਲੀਕੋਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ5 ਇੱਕ ਤੋਂ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ ਤੱਕ, 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 1000 × g 'ਤੇ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰੋ।
1.2.3ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 200 μl PBS ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਵਾਰ-ਵਾਰ ਪਾਈਪ ਨਾ ਲਗਾਓ, ਅਤੇ PBS ਨੂੰ ਸਿੱਧਾ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ।ਸਟੈਪ 2 'ਤੇ ਅੱਗੇ ਵਧੋ। (ਜੇਕਰ ਤੇਜ਼ ਹੋਣਾ ਔਖਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਮੁਅੱਤਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਰੱਦ ਕਰਨ ਤੋਂ 10 ਮਿੰਟ ਬਾਅਦ 1000×g ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸੈੱਲ ਪੈਲੇਟ ਕਦਮ 2 'ਤੇ ਅੱਗੇ ਵਧਦਾ ਹੈ)
2.Cell lysis: ਬਫਰ CL ਨੂੰ ਹਟਾਓ, ਇਸਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ, ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ ਅਤੇ ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II, ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ 1-2 ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਲਾਈਸਿਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸੰਤੁਲਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ: (ਲਾਈਸਿਸ ਹੱਲ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਤਿਆਰ ਹੈ)।
ਟੇਬਲ 1-2: ਕਲੀਵੇਜ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਤਿਆਰੀ (ਨੋਟ: ਬਰਫ਼ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ)
| ਕੰਪੋਨੈਂਟ (ਸੈੱਲ ਲਾਇਸਿਸ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ) | 6-ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 12-ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 24-ਖੂਹ ਪਲੇਟ | 96-ਖੂਹ ਪਲੇਟ | 384-ਖੂਹ ਪਲੇਟ |
| 1000 μl/ਚੰਗੀ | 400 μl/ਚੰਗੀ | 200 μl / ਨਾਲ ਨਾਲ | 50 μl/ਚੰਗੀ | 25 μl/ਚੰਗੀ | |
| ਬਫਰ CL | 960μl | 384μl | 192μl | 48μl | 24μl |
| ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ | 20μl | 8μl | 4μl | 1μl | 0.5 μl |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | 20μl | 8μl | 4μl | 1 μl | 0.5 μl |
3.( 24 -ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ) ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 200 μl ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਮਾਸਟਰ ਮਿਲਾਓ, ਵਾਰ-ਵਾਰ 5-10 ਵਾਰ ਉਡਾਓ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25 ℃) 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
ਨੋਟ ਕਰੋ：ਬੁਲਬਲੇ ਦੇ ਗਠਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਜਦੋਂ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਪਾਈਪੇਟ ਸਕੇਲ ਨੂੰ 200μl ਜਾਂ ਘੱਟ ਤੱਕ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।lysis ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੈੱਲ ਬੱਦਲਵਾਈ ਦਿਖਾਈ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ ਹੈ।
4. (ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ 24 -ਵੱਲ ਪਲੇਟ) ਨੂੰ ਤਰਲ 20 μl ਬਫਰ ST (ਸਾਰਣੀ 1-3 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਵੱਖ-ਵੱਖ lysis ਸਿਸਟਮ ਬਫਰ ST) ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25 ℃) 'ਤੇ 5-10 ਵਾਰ ਪਾਈਪਿੰਗ ਨੂੰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (20-25 ℃) 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਨੋਟ ਕਰੋ：ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪ ਸਤ੍ਹਾ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਨਿਪਟਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ,ਬੁਲਬਲੇ ਦੇ ਗਠਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਜਦੋਂ ਪਾਈਪਟਿੰਗ ਪਾਈਪੇਟ ਸਕੇਲ ਨੂੰ 200μl ਜਾਂ ਘੱਟ ਤੱਕ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਾਰਣੀ 1-3：ਬਫਰ ST ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | 6 - ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 12- ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 24- ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 96- ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ | 384- ਚੰਗੀ ਪਲੇਟ |
| 100 μl/ਚੰਗੀ | 40 μl/ਚੰਗੀ | 20 μl/ਚੰਗੀ | 5 μl/ਚੰਗੀ | 2.5 μl / ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ |
5. ਲਾਈਸੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੇ RT-qPCR ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਜੇਕਰ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਸਮੇਂ ਸਿਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇਸਨੂੰ 2 ਘੰਟੇ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਮੇਂ ਲਈ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਰੱਖੋ, ਅਤੇ -20 ℃ ਜਾਂ -80 ℃ (ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ) 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।
ਬੀ: RT ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
1. 5 × ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ ਕੱਢੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ 'ਤੇ ਰੱਖੋ, ਇਸਨੂੰ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਿਘਲਣ ਦਿਓ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਸਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਲਾਓ;RNase-Free ddH2O ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢੋ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਪਿਘਲਾ ਦਿਓ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਸਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ।ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ 2-1 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।
ਸਾਰਣੀ 2-1: RT ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| RT ਸਿਸਟਮ ਸਮੱਗਰੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ | ਰਕਮ ਨਾਲ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ | |
| 5 × ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ | 4μl | 8 μl | 1 × |
| ਸੈੱਲ ਲਾਇਸੇਟਸ (ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ) | 4 μl | 8 μl | ਸੀਮਾ ਵਿਵਸਥਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ (10 -40%) |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 12 μl | 24 μl | - |
| ਕੁੱਲ ਵੌਲਯੂਮ | 20 μl | 40 μl | - |
2.ਸਿਸਟਮ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨ ਦੇ ਪੂਰਾ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ 2 -2 ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ RT ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਮਿਸ਼ਰਤ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਸਾਰਣੀ 2-2: RT ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਸਥਿਤੀ ਸੈਟਿੰਗ
| ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਮੱਗਰੀ |
| 1 | 42 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂ | 15-30 ਮਿੰਟ | cDNA ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ |
| 2 | 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂ | 5 ਮਿੰਟ | ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ |
| 3 | 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਂ | N/A |
3. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਪੂਰਾ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ qPCR ਲਈ ਸਿੱਧੇ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਰੱਖਿਆ -20℃ ਜਾਂ -80℃ ਰੱਖੋ।
ਨੋਟ: ਗੈਰ-ਸ਼ੁੱਧ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਚਿੱਟੇ ਪਰੀਪੀਟੇਟਸ ਦਿਖਾਈ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਇੱਕ ਆਮ ਵਰਤਾਰਾ ਹੈ।ਅਗਲੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਤੁਰੰਤ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ।
ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ RT ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਹੱਲ ਅਗਲੇ ਪੜਾਅ ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ 10-30% ਤੱਕ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
C: qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
1. ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ 3-1 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸਟੈਪ cDNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ B ਦੀ ਉਚਿਤ ਮਾਤਰਾ।
ਨੋਟ: cDNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਮਾਤਰਾ qPCR ਸਿਸਟਮ ਦੇ 10-30% ਲਈ ਬਣਦੀ ਹੈ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ 20μl qPCR ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ, 2-6 μl lysis ਬਫਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ, ਪਰ 6 μl ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ।
2. qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਚੰਗੀ qPCR ਸਥਿਤੀਆਂ (ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ, ਆਦਿ) (ਸਾਰਣੀ 3-2 'ਤੇ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਥਿਤੀਆਂ)।
ਨੋਟ: ਬਿਹਤਰ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ qPCR ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ।
ਸਾਰਣੀ 3-1: ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
| RT ਸਿਸਟਮ ਸਮੱਗਰੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ | ਰਕਮ ਨਾਲ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ | 10 μl | 1× |
| ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10μM) | 0.4 μl | 50-900 nM 1* |
| ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10μM) | 0.4 μl | 50-900 nM 1* |
| ਪੜਤਾਲ(10μM) | 0.2 μl | 200nM |
| cDNA ਟੈਂਪਲੇਟ (ਕਦਮ B ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ) | 4 μl | 10-30% |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | - | |
| 20×ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ 3* | - | - |
| ਕੁੱਲ ਵੌਲਯੂਮ | 20 μl |
1*: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਮਾੜੀ ਹੋਣ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ 50-900 nM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਨੋਟ: qPCR ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਾਈਕਲਰ ਮਾਡਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।50 ਵਿੱਚ qPCR ਲਈμl ਸਿਸਟਮ, ਰੀਐਜੈਂਟ ਖੁਰਾਕ ਨੂੰ ਅਨੁਪਾਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ 20 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵਿਵਸਥਿਤ ਕਰੋμl ਸਿਸਟਮ.
| ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਮਸ਼ੀਨ | ROX ਸੰਦਰਭ ਡਾਈ ਫਾਈਨਲ ਇਕਾਗਰਤਾ |
| ABI PRISM7000/7300/7700/7900HT/ਕਦਮ ਇੱਕ, ਆਦਿ। | 1×(ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ 20 μl ਸਿਸਟਮ， 1 μl 20×ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ) |
| ABI 7500/7500 ਤੇਜ਼ ਅਤੇ StratageneMx3000P/Mx3005P/Mx4000, ਆਦਿ। | 0.5×(ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ 20 μl ਸਿਸਟਮ, 0.5 μl 20×ROX ਰੈਫਰੈਂਸਡਾਈ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ) |
2*: ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ROX ਸੰਦਰਭ ਡਾਈ ਦੀ ਉਚਿਤ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰੋ।ਆਮ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਸਾਈਕਲਰਾਂ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਉਚਿਤ ROX ਸੰਦਰਭ ਡਾਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੀ ਸਾਰਣੀ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਹਨ:
ਸਾਰਣੀ 3-2: qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ
| ਦੋ-ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ | ਸਮੱਗਰੀ |
| 1 | 95℃ | 3 ਮਿੰਟ | 1 | ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ |
| 2 | 95℃ | 5-10 ਸਕਿੰਟ | 40 | ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਿਕਾਰ |
| 3 | 60-65℃ | 20-30 ਸਕਿੰਟ | ਐਨੀਲਿੰਗ / ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ |
ਨੋਟ: ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ qPCR ਪ੍ਰਭਾਵ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਗਰੇਡੀਐਂਟ PCR ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ, ਟੈਂਪਲੇਟ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਆਦਿ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਖਾਸ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ, ਅਨੁਕੂਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ, ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਕਿਸਮ, ਦਿਲਚਸਪੀ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦਾ ਆਕਾਰ, ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਦਾ ਅਧਾਰ ਕ੍ਰਮ, ਐਂਪਲੀਫਾਈਡ ਸਮਗਰੀ ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਲੰਬਾਈ, ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਆਦਿ ਸਮੇਤ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਥਰਮਲ ਸਾਈਕਲਰ ਦੀਆਂ ਖਾਸ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਸਿਧਾਂਤ
ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ
ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਦੇ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ:
◆ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ: 18-30bp।
◆ GC ਸਮੱਗਰੀ: 40-60%.
◆ Tm ਮੁੱਲ: ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਸੌਫਟਵੇਅਰ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 5, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦਾ Tm ਮੁੱਲ ਦੇ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਅੱਪਸਟਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ Tm ਮੁੱਲ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਨੇੜੇ ਹੋਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।Tm ਗਣਨਾ ਫਾਰਮੂਲਾ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T)।ਪੀਸੀਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, 5 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਟੀਐਮ ਮੁੱਲ ਤੋਂ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਜੋਂ ਚੁਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਅਨੁਸਾਰੀ ਵਾਧਾ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ)।
◆ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦ:
◆ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫੀਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਤਰਜੀਹੀ ਤੌਰ 'ਤੇ 100-150bp ਹੈ।
◆ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਨੂੰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
◆ ਅੱਪਸਟਰੀਮ ਅਤੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ 3′ ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ 2 ਜਾਂ ਵਧੇਰੇ ਪੂਰਕ ਅਧਾਰਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਤੋਂ ਬਚੋ।
◆ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 3′ ਟਰਮੀਨਲ ਬੇਸ 3 ਵਾਧੂ ਲਗਾਤਾਰ G ਜਾਂ C ਦੇ ਨਾਲ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
◆ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਵਿੱਚ ਆਪਣੇ ਆਪ ਵਿੱਚ ਪੂਰਕ ਬਣਤਰ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਬਣਤਰ ਬਣ ਜਾਵੇਗੀ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗੀ।
◆ ATCG ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਬਰਾਬਰ ਵੰਡਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ 3′ ਟਰਮੀਨਲ ਬੇਸ ਨੂੰ T ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਚਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਅੰਤਿਕਾ1：Cell ਡਾਇਰੈਕਟRT-qPCR ਕਿੱਟ ਭਾਗਟੀ ਪੂਰਕ ਪੈਕ
1. ਸੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਹੱਲ
|
| |||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (24-ਵੈੱਲ ਲਾਈਸਿਸ ਸਿਸਟਮ / ਖੂਹ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ਟੀ | 500 ਟੀ | ||
| ਭਾਗਆਈ | ਬਫਰ CL | 20 ਮਿ.ਲੀ | 100 ਮਿ.ਲੀ |
| ਫੋਰਜੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਪਲੱਸ II | 400 μl | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | |
| ਬਫਰ ਐਸ.ਟੀ | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | 10 ਮਿ.ਲੀ | |
| ਭਾਗII | ਡੀਐਨਏ ਇਰੇਜ਼ਰ | 400 μl | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 |
|
| |
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (20 μl ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ਟੀ | |
| 5× ਡਾਇਰੈਕਟ RT ਮਿਕਸ | 800 μl |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 1.7 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 |
3.qPCR ਮਿਕਸ
|
| ||
| ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ (20 μl ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ਟੀ | 1000 ਟੀ | |
| 2× ਡਾਇਰੈਕਟ qPCR ਮਿਕਸ-ਟੈਕਮੈਨ | 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 2 | 1.7 ਮਿਲੀਲੀਟਰ × 6 |
| 20× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ਮੁਕਤ ddH2O | 1.7 ਮਿ.ਲੀ | 10 ਮਿ.ਲੀ |
ਸੰਸਾਰ ਦੇ ਫੋਰਜੀਨ
ਫੋਰਜੀਨ ਕੰ., ਲਿਮਿਟੇਡ
ਟੈਲੀਫ਼ੋਨ: 028-83360257, 028-83361257
E-mail ：info@foregene.com
http://www.foregene.com
