ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਗਾਈਡ

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

ਕੋਈ RNA ਕੱਢਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾ ਸਕਦਾ ਜਾਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਘੱਟ ਹੈ

ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਰਿਕਵਰੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ: ਨਮੂਨਾ ਆਰਐਨਏ ਸਮੱਗਰੀ, ਸੰਚਾਲਨ ਦੀ ਵਿਧੀ, ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ, ਆਦਿ।

ਆਮ ਕਾਰਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ:

1. ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਆਈਸ ਬਾਥ ਜਾਂ ਘੱਟ-ਤਾਪਮਾਨ (4 ° C) ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ।

ਸੁਝਾਅ: ਕਮਰੇ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ (15-25 ° C) ਓਪਰੇਸ਼ਨ, ਕਦੇ ਵੀ ਬਰਫ਼ ਦਾ ਇਸ਼ਨਾਨ ਨਹੀਂ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ।

2. ਬਹੁਤ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਗਲਤ ਨਮੂਨਾ ਸਟੋਰੇਜ ਜਾਂ ਨਮੂਨਾ ਸਟੋਰੇਜ।

ਸੁਝਾਅ: ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ -80 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ ਜਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਵਿੱਚ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪੰਘਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਬਚੋ;RNA ਕੱਢਣ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ।

3. ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਨਮੂਨਾ lysis

ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਨਮੂਨਾ ਅਤੇ ਕੰਮ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਘੋਲ (ਲੀਨੀਅਰ ਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ) ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (15-25 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ) 'ਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਉਬਾਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।

4. ਐਲੂਐਂਟ ਨੂੰ ਗਲਤ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ

ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ RNase-ਮੁਕਤ ddH2O ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦੀ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਮੱਧ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ

5. ਬਫਰ viRW2 ਵਿੱਚ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਗਲਤ ਮਾਤਰਾ

ਸੁਝਾਅ: ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਹਦਾਇਤਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰੋ, ਬਫਰ viRW2 ਵਿੱਚ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।

6. ਗਲਤ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ।

ਸੁਝਾਅ: ਬਫਰ viRL ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ 500μl ਨਮੂਨੇ ਦਾ 200µl।ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ RNA ਕੱਢਣ ਦੀ ਦਰ ਘਟੇਗੀ।

7. ਗਲਤ ਇਲੂਸ਼ਨ ਵਾਲੀਅਮ ਜਾਂ ਅਧੂਰਾ ਇਲੂਸ਼ਨ।

ਸੁਝਾਅ: ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦੀ ਐਲੂਐਂਟ ਵਾਲੀਅਮ 30-50μl ਹੈ;ਜੇਕਰ ਇਲੂਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਤਸੱਲੀਬਖਸ਼ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰੀ-ਹੀਟਿਡ RNase-ਮੁਕਤ ddH ਜੋੜਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।₂ਓ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੱਖਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ 5-10 ਮਿੰਟ

8. ਬਫਰ viRW2 ਵਿੱਚ ਕੁਰਲੀ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਈਥਾਨੋਲ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।

ਸੁਝਾਅ: ਜੇਕਰ ਬਫਰ viRW2 ਵਿੱਚ ਕੁਰਲੀ ਕਰਨ ਅਤੇ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਖਾਲੀ-ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵੀ ਈਥਾਨੌਲ ਬਚਿਆ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਈਥਾਨੌਲ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਖਾਲੀ-ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਛੱਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।

ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਦਾ ਪਤਨ

ਸ਼ੁੱਧ RNA ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨਮੂਨਾ ਸਟੋਰੇਜ਼, RNase ਗੰਦਗੀ, ਅਤੇ ਸੰਚਾਲਨ ਵਰਗੇ ਕਾਰਕਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ।

ਆਮ ਕਾਰਨਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ:

1. ਇਕੱਤਰ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਸਮੇਂ ਸਿਰ ਨਹੀਂ ਬਚੇ ਸਨ।

ਸੁਝਾਅ: ਜੇਕਰ ਨਮੂਨਾ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਇਸਨੂੰ ਤੁਰੰਤ -80 ℃ ਜਾਂ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।RNA ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਲਈ, ਜਦੋਂ ਵੀ ਸੰਭਵ ਹੋਵੇ ਤਾਜ਼ੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕਰੋ।

2.ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਬਾਰ-ਬਾਰ ਠੰਢੇ ਅਤੇ ਪਿਘਲ ਰਹੇ ਸਨ।

ਸੁਝਾਅ: ਨਮੂਨਾ ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸਟੋਰੇਜ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਜੰਮਣ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ (ਇੱਕ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ) ਤੋਂ ਬਚੋ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਘੱਟ ਜਾਵੇਗੀ।

3.RNase ਓਪਰੇਟਿੰਗ ਰੂਮ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ਕੋਈ ਡਿਸਪੋਜ਼ੇਬਲ ਦਸਤਾਨੇ, ਮਾਸਕ, ਆਦਿ ਨਹੀਂ ਪਹਿਨੇ ਗਏ ਸਨ।

ਸੁਝਾਅ: ਆਰਐਨਏ ਅਣੂ ਦੇ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਆਰਐਨਏ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਰੂਮ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਾਰਣੀ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਡਿਸਪੋਸੇਜਲ ਦਸਤਾਨੇ ਅਤੇ ਮਾਸਕ ਪਹਿਨੋ ਤਾਂ ਜੋ RNase ਦੀ ਜਾਣ-ਪਛਾਣ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਆਰਐਨਏ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਿਆ ਜਾ ਸਕੇ।

4. ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਰਤੋਂ ਦੌਰਾਨ RNase ਦੁਆਰਾ ਦੂਸ਼ਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।

ਸੁਝਾਅ: ਸੰਬੰਧਿਤ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਨਵੀਂ ਵਾਇਰਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਨਾਲ ਬਦਲੋ।

5. ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ, ਆਦਿ ਦਾ RNase ਗੰਦਗੀ। ਸੁਝਾਅ: ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬਾਂ, ਪਾਈਪੇਟ ਟਿਪਸ, ਅਤੇ ਪਾਈਪੇਟਸ ਸਾਰੇ RNase-ਮੁਕਤ ਹਨ।

ਸ਼ੁੱਧ RNA ਅਣੂਆਂ ਨੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕੀਤਾ

ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ ਗਏ ਆਰਐਨਏ ਅਣੂ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਨਗੇ ਜੇਕਰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਲੂਣ ਆਇਨ ਜਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ: ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਉੱਤਰੀ ਬਲੌਟ, ਆਦਿ।

1. ਐਲਿਊਟਡ ਆਰਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਲੂਣ ਆਇਨ ਹਨ।

ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼: ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਈਥਾਨੌਲ ਦੀ ਸਹੀ ਮਾਤਰਾ ਬਫ਼ਰ viRW2 ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਅਤੇ ਓਪਰੇਟਿੰਗ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ 'ਤੇ ਸਹੀ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਸਪੀਡ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਾਲਮ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ ਧੋਵੋ；ਜੇ ਅਜੇ ਵੀ ਨਮਕ ਆਇਨ ਬਾਕੀ ਹਨ, ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮ ਵਿੱਚ ਬਫਰ viRW2 ਜੋੜ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਛੱਡ ਸਕਦੇ ਹੋ।ਫਿਰ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੱਦ ਤੱਕ ਲੂਣ ਆਇਨਾਂ ਦੀ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਕਰੋ

2. ਐਲੀਊਟਡ ਆਰਐਨਏ ਅਣੂਆਂ ਵਿੱਚ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਈਥਾਨੌਲ ਹਨ

ਸੁਝਾਅ: ਇੱਕ ਵਾਰ ਇਹ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਿ ਬਫਰ viRW2 ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਾਲਮਾਂ ਨੂੰ ਧੋ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਓਪਰੇਟਿੰਗ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗਲ ਸਪੀਡ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਖਾਲੀ-ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਕਰੋ।ਜੇਕਰ ਅਜੇ ਵੀ ਈਥਾਨੌਲ ਬਚਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਸ ਨੂੰ ਖਾਲੀ ਟਿਊਬ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਛੱਡਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਈਥਾਨੋਲ ਨੂੰ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੱਦ ਤੱਕ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।

ਨਿਰਦੇਸ਼ ਮੈਨੂਅਲ:

ਵਾਇਰਲ RNA ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਨਿਰਦੇਸ਼ ਮੈਨੂਅਲ