ਫੋਰਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ
ਵਰਣਨ
ForeDirect RT-qPCR ਕਿੱਟ ਨੂੰ ਆਰਐਨਏ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਵੈਬ ਕਲੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਆਰਐਨਏ ਡਾਇਰੈਕਟ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਕਿੱਟ ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਦੇ ਅੰਦਰ qRT-PCR ਚੱਕਰਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਸ, ਹੌਟ-ਸਟਾਰਟ ਟਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਆਰਨੇਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦਾ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੈ।ਰਿਐਕਸ਼ਨ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ਲੋੜੀਂਦੇ ਹਿੱਸੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਬਫਰ ਕੰਪੋਨੈਂਟ, ਐਮ.ਜੀ.2+, dUTP, ਅਤੇ dNTPs।
ਨਿਰਧਾਰਨ
100ਟੀ
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਰੀਲੀਜ਼ ਏਜੰਟ |
ਆਰਐਨਏ ਰੱਖਿਅਕ |
2× RT-qPCR ਬਫਰ |
ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ(Taq&M-MLV) |
ਹਦਾਇਤਾਂ |
ਪੀਸੀਆਰ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ
1. ਇੱਕ ਵਾਰ ਜਦੋਂ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਟਿਊਬਾਂ ਨੂੰ ਥੋੜ੍ਹੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਯੰਤਰ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਟੈਂਕ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ।
2. ਥਰਮਲ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ
ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ | |
1 | ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ | 50℃ | 15 ਮਿੰਟ | 1 |
2 | ਪ੍ਰੀ-ਡੈਨਚਰੇਸ਼ਨ | 95℃ | 1 ਮਿੰਟ | 1 |
3 | ਵਿਕਾਰ | 95℃ | 10 ਸਕਿੰਟ | 42 |
4 | ਐਨੀਲ/ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ | 60℃ | 30 ਸਕਿੰਟ |
ਨੋਟ:ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਸਿਗਨਲ ਹਰੇਕ ਚੱਕਰ ਦੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਪੜਾਅ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
3. ਸੈੱਟ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਫਾਈਲ ਨੂੰ ਸੇਵ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਚਲਾਓ।
ਓਪਰੇਟਿੰਗ ਕਦਮ
ਰੀਐਜੈਂਟ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਕਿੱਟ ਵਿਚਲੇ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਪਿਘਲਾ ਕੇ ਨਰਮੀ ਨਾਲ ਮਿਲਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਰੀਐਜੈਂਟ ਦੀ ਤਿਆਰੀ
1. ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਰੀਲੀਜ਼ ਮਿਕਸ ਤਿਆਰ ਕਰੋ
ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ ਜਾਂ ਨਿਯੰਤਰਣ |
ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਰੀਲੀਜ਼ ਏਜੰਟ | 5μL |
ਆਰਐਨਏ ਰੱਖਿਅਕ | 0.5 μL |
2. ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਤਿਆਰ ਕਰੋ
ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ ਜਾਂ ਨਿਯੰਤਰਣ |
2× RT-qPCR ਬਫਰ | 15 μL |
ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ(Taq&M-MLV) | 1.5 μL |
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਪੜਤਾਲਾਂ | 1μL |
ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ
-ਕਿੱਟ ਨੂੰ -20 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ± 5℃.ਵੈਧਤਾ ਦੀ ਮਿਆਦ 12 ਮਹੀਨੇ ਹੈ।
-ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਚੱਕਰਾਂ (<5 ਚੱਕਰ) ਤੋਂ ਬਚੋ।