ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ
ਵਰਣਨ
ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਕਿੱਟ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪੈਕ ਕੀਤੇ RT-qPCR ਬਫਰ ਅਤੇ ਉੱਚ ਕੁਸ਼ਲ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਮਿਸ਼ਰਣ (Taq、M-MLV、RI), ਇਸ ਨੂੰ ਬੈਕ-ਐਂਡ ਕਿੱਟਾਂ ਅਤੇ ਸਿਸਟਮ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸੁਵਿਧਾਜਨਕ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈਵਿਵਸਥਾ, ਸਧਾਰਨ ਤਸਦੀਕ ਦੇ ਅੰਦਰ।
ਨਿਰਧਾਰਨ
500T, 50,000T
ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
ਕਿੱਟ ਸਮੱਗਰੀ (20 μL ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ਟੀ | 50,000 ਟੀ | |
ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ | 500 μL×1 | 50 ਮਿ.ਲੀ×1 |
2× ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਬਫਰ | 1 ਮਿ.ਲੀ×5 | 500 ਮਿ.ਲੀ×1 |
ਹਦਾਇਤ | 1 | 1 |
ਓਪਰੇਟਿੰਗ ਕਦਮ
ਰੀਐਜੈਂਟ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਕਿੱਟ ਵਿਚਲੇ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਾਂ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਪਿਘਲਾ ਕੇ ਨਰਮੀ ਨਾਲ ਮਿਲਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
A: ਤਿਆਰ ਕਰੋ of ਟੈਮਪਲੇਟ ਅਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟ
1. ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਤਿਆਰ ਕਰੋ (ਆਰਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਫੋਰਜੀਨ ਟੋਟਲ ਆਰਐਨਏ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਕਿੱਟ ਸੀਰੀਜ਼ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ) ਜਾਂ ਨਮੂਨਾ ਕ੍ਰੈਕਿੰਗ ਉਤਪਾਦ (ਫੋਰਜੀਨ ਲਾਈਸਿਸ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ), ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10 μM) ਅਤੇ ਹੋਰ ਸੰਬੰਧਿਤ ਉਪਭੋਗ ਸਮੱਗਰੀ, ਸਾਧਨ।
2. 2× ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਬਫਰ, RNase-ਮੁਕਤ ddH2O ਅਤੇ 20× ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ (ਜੇ ਇਹ's ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ) ਬਰਫ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਬਕਸੇ ਵਿੱਚ, ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਕੁਦਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਿਘਲਣਾ, ਅਤੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
B: ਤਿਆਰ ਕਰੋ of RT-qPCR ਸਿਸਟਮ
ਟੇਬਲ 1 : ਤਿਆਰ ਕਰੋ of RT-qPCR sਸਿਸਟਮ
ਕੰਪੋਨੈਂਟ | ਵਾਲੀਅਮ | ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ |
2× ਡਾਇਰੈਕਟ RT-qPCR ਬਫਰ | 10 μL | 1× |
ਡਾਇਰੈਕਟ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ | 1μL | |
ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ਪੜਤਾਲ(4 μM) | 1μL | 200nM |
ਟੈਂਪਲੇਟ(RNA ਜਾਂ Lysate) | X μL | |
20×ROX ਰੈਫਰੈਂਸ ਡਾਈ | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
ਕੁੱਲ ਵੌਲਯੂਮ | 20μL |
C: ਸੈੱਟ ਕਰੋ ਦੀ RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ
ਟੇਬਲ 2 : RT-qPCR ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆon ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਸੈਟਿੰਗ (ਲਈ ਉਦਾਹਰਨ: ਦੋ-ਕਦਮ ਢੰਗ)
ਕਦਮ | ਤਾਪਮਾਨ | ਸਮਾਂ | ਸਾਈਕਲ | ਸਮੱਗਰੀ | |
1 | 50℃ | 15 ਮਿੰਟ | 1* | 1 | ਉਲਟਾ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ |
2 | 95℃ | 1 ਮਿੰਟ | 1 | ਪ੍ਰੀ-ਡੈਨਚਰੇਸ਼ਨ | |
3 | 95℃ | 10 ਸਕਿੰਟ | 40-45 | ਵਿਕਾਰ | |
60℃ | 30 ਸਕਿੰਟ 2* | ਐਨੀਲ/ਐਕਸਟੈਨਸ਼ਨ |
ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਸ਼ੈਲਫ ਲਾਈਫ
-ਕਿੱਟ ਨੂੰ -20 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ± 5℃.ਵੈਧਤਾ ਦੀ ਮਿਆਦ 12 ਮਹੀਨੇ ਹੈ।
-ਵਾਰ-ਵਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਥੌਅ ਚੱਕਰਾਂ (<5 ਚੱਕਰ) ਤੋਂ ਬਚੋ।